[教育]移植免疫及其免疫檢測

1、移植免疫及其免疫檢驗(yàn),P380,移 植 免 疫,1954年12月23日，世界上第一例成功器官移植手術(shù)在美國波士頓進(jìn)行1960年，吳階平教授開展了國內(nèi)首例腎移植。,后排左起為約瑟夫·E·默里、約翰·梅瑞爾和哈特維爾·哈里森醫(yī)師前排為接受手術(shù)的孿生兄弟,,機(jī)體接受其他個(gè)體的細(xì)胞，組織或器官后，機(jī)體與移植物相互作用所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。,宿主抗移植物反應(yīng)（host versus graft reje

2、ction，HVGR）移植物抗宿主反應(yīng)（graft versus host rejection，GVHR）,供者(donor),移植物(graft),移植免疫：,按供受者之間的關(guān)系：①自體移植②同系移植③同種異基因移植④異種移植按移植物的來源：①尸體供移植②活體供移植,移植的分類：,（一）主要組織相容性抗原組織相容性： 組織器官移植時(shí)，供受者相互接受的程度。組織相容性抗原/移植抗原： 存在于組織細(xì)胞表面的

3、決定組織相容性的同種異型表位。,第一節(jié) 引起排斥反應(yīng)的靶抗原,主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility comlex，MHC） 指編碼主要組織相容性抗原的一組緊密連鎖的基因群。不僅在控制移植排斥反應(yīng)中起重要作用，而且在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。,HLA復(fù)合體與HLA分子/系統(tǒng),,HLA復(fù)合體1.定位：2.結(jié)構(gòu)：⑴HLA—Ⅰ類基因區(qū)⑵HLA—Ⅱ類基因區(qū)⑶HLA—Ⅲ類基因區(qū),HLA分子

4、觸發(fā)移植排斥的抗原：ⅠⅡ類分子尤以HLA－DR最重要,其次B、A、DQ、DP,（二）次要組織相容性抗原（mHA）（三）其他組織相容性抗原1.ABO抗原系統(tǒng)：* 供者與受者ABO血型不配合 ?受者血清抗體與移植物血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的ABO抗原結(jié)合 ?血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和血管內(nèi)凝血2.組織特異性抗原： 移植排斥強(qiáng)度：皮膚＞腎＞肝臟,,第二節(jié)移植排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機(jī)制,一、宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）,（一）超

5、急性排斥反應(yīng) 移植物血液循環(huán)恢復(fù)后數(shù)分鐘至1～2天內(nèi)發(fā)生的不可逆的體液排斥反應(yīng)。 原因：受者體內(nèi)預(yù)存抗供者的Ab：①供、受者間ABO等血型不符；②受者血液中含有抗供者白細(xì)胞，血小板的Ab；③非免疫因素：如灌流沖洗不徹底等。,（二）急性排斥反應(yīng)——最常見 移植后1周～3個(gè)月內(nèi)發(fā)生的排斥,（一）直接識(shí)別(direct recognition)：受者T細(xì)胞TCR特異性識(shí)別供者APC表面的同種異型MHC抗原。,T細(xì)胞

6、——MHC抗原 受者 供者,（2）間接識(shí)別(indirect recognition)：,供者M(jìn)HC抗原被受者APC進(jìn)行加工、處理，以抗原肽：MHC II類分子復(fù)合物的形式提呈給受者T細(xì)胞，使之活化，引起排斥反應(yīng)。,機(jī)制：等同于普通外源性Ag?CD4＋T*特點(diǎn)：出現(xiàn)較晚，強(qiáng)度弱,（三）慢性排斥反應(yīng) 發(fā)生于移植后數(shù)月、甚至數(shù)年，是影響移植器官長期存活的主要障礙。,,二、移植物抗宿主反應(yīng) (GVHR) 移植物中

7、淋巴細(xì)胞，識(shí)別受者的同種異型抗原，誘發(fā)針對(duì)受者的排斥反應(yīng)。發(fā)生條件： ①移植物中含一定數(shù)量成熟的淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)； ②供、受者間組織相容性差; ③宿主的免疫功能狀態(tài)低下。常見于：骨髓、胸腺、脾等移植或大量輸血后機(jī)制：供者CD4+T細(xì)胞識(shí)別宿主MHC抗原臨表：炎癥性疾病，皮疹、腹瀉、肺炎等。,Graft versus host disease,一、血清學(xué)分型法（Serological Typing）HLA-A、B、C、D

8、R、DQ抗原可用血清學(xué)方法鑒定，故稱為SD抗原（Serological defined antigen ）方法：Terasaki等改良的微量補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC test）該方法簡便易行、結(jié)果可靠、重復(fù)性好，被美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）認(rèn)可,成為國際通用的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù),第三節(jié) HLA的分型,原理：用一系列已知抗HLA的標(biāo)準(zhǔn)分型血清與待測淋巴細(xì)胞混合，借助補(bǔ)體的生物學(xué)作用介導(dǎo)細(xì)胞裂解，死亡的細(xì)胞可被染料著色。,待測淋巴

9、細(xì)胞,標(biāo)準(zhǔn)抗血清,補(bǔ)體,二、細(xì)胞分型法（Cellular Typing） HLA-Ⅱ類抗原中的D、DP抗原過去采用細(xì)胞分型法檢測，故又稱LD抗原（lymphocyte defined antigen） 以混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture，MLC）為基本技術(shù)的HLA分型法。,-判斷待檢細(xì)胞的HLA型別/LC反應(yīng)強(qiáng)度的指標(biāo),-異體器官移植前的HLA配型,三、分子生物學(xué)分型法 P388,基本

10、原則： ①供者與受者間HLA盡可能相符，以降低移植物組織抗原的免疫原性 ②非特異性抑制受者的免疫應(yīng)答 ③誘導(dǎo)受者對(duì)移植物的特異性免疫耐受,第四節(jié) 排斥反應(yīng)預(yù)防與治療,（一）選擇合適的供者多數(shù)情況下只檢測HLA-A、B、DR不同的器官移植對(duì)HLA配型的要求有所不同 骨髓等對(duì)HLA配型要求很高 腎、心臟、胰腺等，HLA－DR配型重要 肝、肺/心移植主要要求ABO血型配合，不作HLA配型對(duì)移植后果無明顯影響。1.HLA配型

11、 常用方法是CDC test、MLC,,2.HLA交叉配型與檢測預(yù)存抗體（1）淋巴細(xì)胞交叉配合試驗(yàn) 無論抗體是針對(duì)Ⅰ類還是Ⅱ類HLA，只要細(xì)胞毒性超過10%，則表明受者體內(nèi)已有細(xì)胞毒性抗體，應(yīng)另選供者；若小于10%則為陰性，表明供受者匹配。（2）T細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型 無論反應(yīng)水平高低，均為移植的禁忌癥（3）B細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型（4）自身交叉配型,（腎常規(guī)項(xiàng)目）,受者血清－供者細(xì)胞,（二）移植物與受體

12、的預(yù)處理1.對(duì)移植物進(jìn)行預(yù)處理 移植術(shù)前應(yīng)充分清除移植物中的過客白細(xì)胞，以減輕排斥反應(yīng)2.受體的準(zhǔn)備 移植前應(yīng)用一定的免疫抑制劑可有效的提高器官移植的成功率。,（三）免疫抑制措施1.免疫抑制劑的應(yīng)用抑制代謝藥物和激素：常用的是硫唑嘌呤和環(huán)磷酰胺。抑制T細(xì)胞活化的藥物 ：環(huán)孢菌素A(CsA) 抗體及其他生物制劑 ：針對(duì)免疫細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體可用于抑制相應(yīng)免疫細(xì)胞活化及功能2.免疫耐受的誘導(dǎo),（一）體液免疫

13、水平檢測相關(guān)的免疫指標(biāo)主要有ABO血型抗體、其他血型抗體、HLA抗體、抗供者組織細(xì)胞抗體、血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體等。常用各種交叉配型、CDC試驗(yàn)等進(jìn)行檢測。,第四節(jié) 排斥反應(yīng)的免疫檢測,（二）細(xì)胞免疫水平檢測包括參與細(xì)胞免疫的有關(guān)細(xì)胞數(shù)量、功能和細(xì)胞因子水平的檢測1.外周血T細(xì)胞及其亞類的計(jì)數(shù)2.4hT細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 取受者PBMC加入標(biāo)記物直接培養(yǎng)4小時(shí)摻入法測其轉(zhuǎn)化率，以預(yù)報(bào)急性排斥反應(yīng)危象3.NK細(xì)胞活性測定4.血清細(xì)

14、胞因子的測定,（三）補(bǔ)體水平的檢測 補(bǔ)體的數(shù)量及活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有密切關(guān)系（四）急性時(shí)相反應(yīng)物質(zhì)的檢測 C反應(yīng)蛋白（CRP）、IL-1、IL-6、TNF-α等是發(fā)生炎癥的標(biāo)志性分子,移植免疫及其免疫檢測,教學(xué)要求：1.掌握移植免疫的概念及移植排斥反應(yīng)的基本類型；2.掌握HVGR及GVHR的發(fā)生機(jī)制；3.掌握移植免疫的免疫檢測內(nèi)容和檢測方法；4.熟悉同種異型抗原的遞呈與識(shí)別機(jī)制；5.熟悉同種異型移植排斥