IAA微量平板放射免疫檢測法的建立及其臨床應用.pdf

1、第一部分胰島素自身抗體微量平板放射免疫檢測法的建立與評價 目的: 1.建立胰島素自身抗體(IAA)微量平板放射免疫檢測法，并進行評價。2.比較國產(chǎn)人血清胰島素抗體放射免疫(RIA)試劑盒和IAA微量平板放射免疫檢測法的檢測結(jié)果。 方法: 選擇按1999年WHO標準診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，健康對照317例。將稀釋的<'125>I-insulin抗原與5μl血清在平板上孵育72小時后，轉(zhuǎn)移至包被好蛋白

2、A的濾膜平板上，洗滌完畢后用Trilux多功能閃爍儀檢測沉淀物的放射性計數(shù)，并換算成IAA指數(shù)進行結(jié)果判斷。對檢測的實驗條件(放射計數(shù)、血清量、孵育時間和方式)進行優(yōu)化,評價方法的批內(nèi)和批間變異、重復性。參加2005年糖尿病自身抗體檢測標準化評估(DASP 2005)來評價該方法的靈敏度與特異性。國產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒與該方法分別檢測96例的IAA或IA血清標本，比較兩種方法的一致性。 結(jié)果: 1.檢測條件優(yōu)化加入放

3、射計數(shù)為20000的<'125>I-insulin抗原及5ul血清緩慢振搖孵育72小時信噪比為最佳。2.方法的批內(nèi)變異系數(shù)為4.1[％].8.5[％]，批間變異系數(shù)為4.5[％].10.7[％]，重復性檢測中的三次結(jié)果判斷完全一致，IAA指數(shù)呈顯著正相關(r=0.729～0.917,P均<0.001)。3.317例健康人的IAA指數(shù)第99個百分位點為陽性閾值0.06，用該法檢測71例T1DM患者陽性率為19.7[％]。4.盲法檢測150

4、例DASP2005標本，診斷T1DM的敏感性為50[％]，特異性為97[％]。5.國產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒與之進行比較，結(jié)果判定總體一致率為72.9[％]，Kappa值=0.402，IAA或IA指數(shù)的相關系數(shù)為0.678(P<0.001)。 結(jié)論: 1.本研究建立的IAA微量平板放射免疫檢測法重復性、靈敏度與特異性好，可用于臨床及科研的IAA檢測。2.國產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒特異性好，敏感性不足，中低滴度的IA

5、A或IA陽性患者易被漏診。 第二部分 GADA、IA-2A、IAA聯(lián)合檢測對自身免疫糖尿病的診斷價值 目的：分析GADA、IA-2A、IAA單獨或聯(lián)合檢測在不同類型糖尿病患者中的診斷價值。 方法：選擇按1999年WHO標準診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，臨床初診T2DM患者551例，成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者94例。用微量平板放射免疫檢測法檢測IAA，用放射配體法檢測GADA、IA

6、-2A。觀察三種抗體的檢出分布，比較分析三種抗體單獨或聯(lián)合在不同類型糖尿病患者中的檢測價值。 結(jié)果：1.T1DM組中，GADA、IA-2A、IAA陽性率分別為66.2％、45.1％、19.7％。IAA與GADA、IA-2A重疊率為85.7％，三種抗體聯(lián)合檢測的陽性率為80.3％。經(jīng)典T1DM的IAA、GADA和IA-2A三種抗體聯(lián)合檢測的陽性率為89.0％，高于任一單個抗體陽性率(P<0.05=；成人T1DM三種抗體聯(lián)合檢測的陽

7、性率為75.0％，高于IA-2A、IAA單個或聯(lián)合陽性率(P<01001)。0-9歲組T1DM中IA-2A和IAA的陽性率分別為77.8％和55.6％，高于10歲及以上的T1DM患者(P<0.05)。各年齡段的T1DM患者GADA陽性率沒有顯著性差異。2.臨床初診T2DM患者中， GADA、IA-2A、IAA陽性率分別為6.72％、2.54％、1.45％。IAA與GADA、IA-2的陽性重疊率為12.5％，三種抗體聯(lián)合檢測的陽性率為9.

8、27％，高于IA-2A，IAA單個或聯(lián)合陽性率(P<0.001)。GADA抗體在25-34歲組陽性率最高，達24.0％，顯著高于其它年齡段。IA-2A、IAA在各年齡段臨床初診T2DM患者中陽性率未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 結(jié)論：GADA對自身免疫糖尿病的診斷敏感性最好，受年齡影響小，對年長的自身免疫糖尿病患者的診斷價值尤高。IAA、IA-2A的陽性率隨年齡增加而下降，兩者對兒童T1DM患者的診斷敏感性較高。GADA、IA-2A、IA

9、A聯(lián)合檢測優(yōu)于單一抗體檢測，可提高自身免疫糖尿病診斷的敏感性。 第三部分 IAA在中國糖尿病人群中的分布及其與臨床特征的關系 目的：初步探討IAA在糖尿病患者中的頻數(shù)分布特點及其與臨床特征的關系。 方法：選擇按1999年WHO標準診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，臨床初診T2DM患者551例，成人隱匿性自身免疫糖尿病(IADA)患者94例。以上患者均已進行了IAA、GADA、IA-2A的檢測。觀察I

10、AA指數(shù)的頻率分布情況，并根據(jù)IAA陽性與否進行分組，比較各亞組間的臨床特征。 結(jié)果：1．匹配年齡后比較，中國T1DM人群中IAA陽性率低于其它國家的研究報道，與哥倫比亞、澳大利亞、芬蘭、比利時、德國等的報道有顯著性差異(P<0.05)，與英國、日本、阿根廷的報道無顯著性差異(P>0.05)。2．健康對照組、臨床初診T2DM組、LADA組IAA指數(shù)的頻數(shù)大致成正態(tài)分布，三組之間IAA陽性率沒有統(tǒng)計學差異。3．T1DM與臨床初診T

11、2DM患者中IAA陽性組與IAA陰性匹配組的臨床特征(體重指數(shù)、糖化血紅蛋白、HOMA指數(shù)、C肽水平)未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P>0.05)。4．臨床初診T2DM患者中IAA陽性隨訪組與IAA陰性隨訪匹配組相比，空腹胰島素水平、HOMA指數(shù)、糖化血紅蛋白1年隨訪與基線的差值亦未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結(jié)論：1．中國糖尿病人群中IAA陽性率低，T1DM患者IAA陽性率低于其它國家的研究結(jié)果，臨床初診T2DM患者和LADA患者