IAA微量平板放射免疫檢測(cè)法的建立及其臨床應(yīng)用.pdf

1、第一部分胰島素自身抗體微量平板放射免疫檢測(cè)法的建立與評(píng)價(jià) 目的: 1.建立胰島素自身抗體(IAA)微量平板放射免疫檢測(cè)法，并進(jìn)行評(píng)價(jià)。2.比較國(guó)產(chǎn)人血清胰島素抗體放射免疫(RIA)試劑盒和IAA微量平板放射免疫檢測(cè)法的檢測(cè)結(jié)果。 方法: 選擇按1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，健康對(duì)照317例。將稀釋的<'125>I-insulin抗原與5μl血清在平板上孵育72小時(shí)后，轉(zhuǎn)移至包被好蛋白

2、A的濾膜平板上，洗滌完畢后用Trilux多功能閃爍儀檢測(cè)沉淀物的放射性計(jì)數(shù)，并換算成IAA指數(shù)進(jìn)行結(jié)果判斷。對(duì)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)條件(放射計(jì)數(shù)、血清量、孵育時(shí)間和方式)進(jìn)行優(yōu)化,評(píng)價(jià)方法的批內(nèi)和批間變異、重復(fù)性。參加2005年糖尿病自身抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)估(DASP 2005)來(lái)評(píng)價(jià)該方法的靈敏度與特異性。國(guó)產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒與該方法分別檢測(cè)96例的IAA或IA血清標(biāo)本，比較兩種方法的一致性。 結(jié)果: 1.檢測(cè)條件優(yōu)化加入放

3、射計(jì)數(shù)為20000的<'125>I-insulin抗原及5ul血清緩慢振搖孵育72小時(shí)信噪比為最佳。2.方法的批內(nèi)變異系數(shù)為4.1[％].8.5[％]，批間變異系數(shù)為4.5[％].10.7[％]，重復(fù)性檢測(cè)中的三次結(jié)果判斷完全一致，IAA指數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.729～0.917,P均<0.001)。3.317例健康人的IAA指數(shù)第99個(gè)百分位點(diǎn)為陽(yáng)性閾值0.06，用該法檢測(cè)71例T1DM患者陽(yáng)性率為19.7[％]。4.盲法檢測(cè)150

4、例DASP2005標(biāo)本，診斷T1DM的敏感性為50[％]，特異性為97[％]。5.國(guó)產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒與之進(jìn)行比較，結(jié)果判定總體一致率為72.9[％]，Kappa值=0.402，IAA或IA指數(shù)的相關(guān)系數(shù)為0.678(P<0.001)。 結(jié)論: 1.本研究建立的IAA微量平板放射免疫檢測(cè)法重復(fù)性、靈敏度與特異性好，可用于臨床及科研的IAA檢測(cè)。2.國(guó)產(chǎn)人血清胰島素抗體RIA試劑盒特異性好，敏感性不足，中低滴度的IA

5、A或IA陽(yáng)性患者易被漏診。 第二部分 GADA、IA-2A、IAA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)自身免疫糖尿病的診斷價(jià)值 目的：分析GADA、IA-2A、IAA單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)在不同類(lèi)型糖尿病患者中的診斷價(jià)值。 方法：選擇按1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，臨床初診T2DM患者551例，成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者94例。用微量平板放射免疫檢測(cè)法檢測(cè)IAA，用放射配體法檢測(cè)GADA、IA

6、-2A。觀察三種抗體的檢出分布，比較分析三種抗體單獨(dú)或聯(lián)合在不同類(lèi)型糖尿病患者中的檢測(cè)價(jià)值。 結(jié)果：1.T1DM組中，GADA、IA-2A、IAA陽(yáng)性率分別為66.2％、45.1％、19.7％。IAA與GADA、IA-2A重疊率為85.7％，三種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為80.3％。經(jīng)典T1DM的IAA、GADA和IA-2A三種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為89.0％，高于任一單個(gè)抗體陽(yáng)性率(P<0.05=；成人T1DM三種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)

7、性率為75.0％，高于IA-2A、IAA單個(gè)或聯(lián)合陽(yáng)性率(P<01001)。0-9歲組T1DM中IA-2A和IAA的陽(yáng)性率分別為77.8％和55.6％，高于10歲及以上的T1DM患者(P<0.05)。各年齡段的T1DM患者GADA陽(yáng)性率沒(méi)有顯著性差異。2.臨床初診T2DM患者中， GADA、IA-2A、IAA陽(yáng)性率分別為6.72％、2.54％、1.45％。IAA與GADA、IA-2的陽(yáng)性重疊率為12.5％，三種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為9.

8、27％，高于IA-2A，IAA單個(gè)或聯(lián)合陽(yáng)性率(P<0.001)。GADA抗體在25-34歲組陽(yáng)性率最高，達(dá)24.0％，顯著高于其它年齡段。IA-2A、IAA在各年齡段臨床初診T2DM患者中陽(yáng)性率未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 結(jié)論：GADA對(duì)自身免疫糖尿病的診斷敏感性最好，受年齡影響小，對(duì)年長(zhǎng)的自身免疫糖尿病患者的診斷價(jià)值尤高。IAA、IA-2A的陽(yáng)性率隨年齡增加而下降，兩者對(duì)兒童T1DM患者的診斷敏感性較高。GADA、IA-2A、IA

9、A聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于單一抗體檢測(cè)，可提高自身免疫糖尿病診斷的敏感性。 第三部分 IAA在中國(guó)糖尿病人群中的分布及其與臨床特征的關(guān)系 目的：初步探討IAA在糖尿病患者中的頻數(shù)分布特點(diǎn)及其與臨床特征的關(guān)系。 方法：選擇按1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)診斷的尚未使用胰島素治療的T1DM患者71例，臨床初診T2DM患者551例，成人隱匿性自身免疫糖尿病(IADA)患者94例。以上患者均已進(jìn)行了IAA、GADA、IA-2A的檢測(cè)。觀察I

10、AA指數(shù)的頻率分布情況，并根據(jù)IAA陽(yáng)性與否進(jìn)行分組，比較各亞組間的臨床特征。 結(jié)果：1．匹配年齡后比較，中國(guó)T1DM人群中IAA陽(yáng)性率低于其它國(guó)家的研究報(bào)道，與哥倫比亞、澳大利亞、芬蘭、比利時(shí)、德國(guó)等的報(bào)道有顯著性差異(P<0.05)，與英國(guó)、日本、阿根廷的報(bào)道無(wú)顯著性差異(P>0.05)。2．健康對(duì)照組、臨床初診T2DM組、LADA組IAA指數(shù)的頻數(shù)大致成正態(tài)分布，三組之間IAA陽(yáng)性率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3．T1DM與臨床初診T

11、2DM患者中IAA陽(yáng)性組與IAA陰性匹配組的臨床特征(體重指數(shù)、糖化血紅蛋白、HOMA指數(shù)、C肽水平)未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。4．臨床初診T2DM患者中IAA陽(yáng)性隨訪(fǎng)組與IAA陰性隨訪(fǎng)匹配組相比，空腹胰島素水平、HOMA指數(shù)、糖化血紅蛋白1年隨訪(fǎng)與基線(xiàn)的差值亦未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：1．中國(guó)糖尿病人群中IAA陽(yáng)性率低，T1DM患者IAA陽(yáng)性率低于其它國(guó)家的研究結(jié)果，臨床初診T2DM患者和LADA患者