條帶免疫檢測(cè)法用于HIV感染臨床確證的效果評(píng)價(jià).pdf

1、背景和目的：艾滋病(AIDS)是因感染人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)引起的嚴(yán)重傳染病，自1981年首次被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，以難以遏制的速度在全球持續(xù)蔓延。目前，雖有預(yù)防性疫苗的研發(fā)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，但由于(HIV)的高度遺傳變異性，其前景尚不樂(lè)觀。因此方便、快速、高效的HIV診斷技術(shù)是控制艾滋病流行的重要手段。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HIV感染的方法很多，根據(jù)衛(wèi)生部2004年頒布的《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》，HIV抗體檢測(cè)作為篩查HIV病毒攜帶者的主要檢測(cè)手段。

2、檢測(cè)分為初篩、復(fù)檢和確證三個(gè)步驟，確證試劑通常采用免疫印跡(WB)法。 確證試劑制備的技術(shù)難度高，質(zhì)量要求嚴(yán)格，國(guó)內(nèi)外僅有少數(shù)企業(yè)生產(chǎn)，市場(chǎng)價(jià)格比較高。而且WB法本身也存在一些缺陷：如制備工藝存在生物安全性問(wèn)題；用于臨床檢測(cè)時(shí)非特異性反應(yīng)多、背景高；對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)要求比較高。 條帶免疫印跡(LIA)法是WB法的一種改進(jìn)方法。其原理是用基因工程重組蛋白或合成多肽替代WB法所用的病原體提取物，作為診斷試劑的抗原，經(jīng)蛋白噴點(diǎn)

3、三維平臺(tái)包被于固相載體上。通過(guò)調(diào)配各抗原組分上樣濃度，可以提高各組分對(duì)抗體的檢測(cè)能力。本課題改良這種技術(shù)用于確證HIV感染，并以國(guó)內(nèi)目前最常用的HIVWB法抗體確證試劑作為參比試劑，從試劑檢測(cè)水平(靈敏度、特異度、窗口期、檢測(cè)限等)、可操作性、生產(chǎn)成本等方面進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。 材料與方法：制備LIA法試劑所用的抗原由浙江澳亞生物工程研究院構(gòu)建表達(dá)，包括HIV中國(guó)流行株特異性重組抗原gp41、gP120、p17、p24、p55、p31

4、、HIV-2gp36等。固相載體選擇Pall公司生產(chǎn)的硝酸纖維素膜。參比試劑選用杭州澳亞生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體確證試劑盒(WB法)。評(píng)價(jià)樣本分別為HIV抗體確證試劑國(guó)家參考血清、BBI公司HIV抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)血清盤(pán)、公司自制HIV抗體檢測(cè)限質(zhì)控血清盤(pán)。臨床評(píng)價(jià)樣本由中國(guó)性病艾滋病預(yù)防控制中心國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室等4家單位采集。 初步建立LIA法確證試劑的制備方法和檢測(cè)方法，檢測(cè)上述樣本，統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算試劑的靈敏度、特

5、異性等評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)。通過(guò)生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)、成本核算，評(píng)價(jià)LIA法試劑盒批量生產(chǎn)的可行性；通過(guò)訪問(wèn)試驗(yàn)人員，了解其對(duì)LIA法用于臨床檢驗(yàn)的認(rèn)可度，主要包括操作是否較WB法方便、結(jié)果是否較WB法易判等。 結(jié)果：檢測(cè)27份國(guó)家參考血清，結(jié)果12份陰性參考品均為陰性反應(yīng)，10份HIV陽(yáng)性參考品均為陽(yáng)性反應(yīng)，5份不確定參考品結(jié)果無(wú)陰性反應(yīng)。用LIA法和WB法分別檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)血清盤(pán)，LIA法在第33天可以檢測(cè)到針對(duì)gp41的抗體，優(yōu)于WB法。

6、用LIA法和WB法分別檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)限質(zhì)控血清盤(pán)，LIA法可判定1：40000稀釋比的血清，優(yōu)于WB法。臨床檢驗(yàn)結(jié)果LIA法確證試劑盒的靈敏度為100％、特異度為98.3％，而WB法檢測(cè)的靈敏度為98.8％、特異度為93.9％。gp41和p24在檢測(cè)中出現(xiàn)頻次較高，可以作為HIV陽(yáng)性的主要判斷標(biāo)準(zhǔn)。HBV感染者比其他人群更容易檢測(cè)出不確定結(jié)果。 結(jié)論: 在本次評(píng)價(jià)中，LIA法各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到或超過(guò)WB法水平，而且生產(chǎn)成本更低，操