食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)檢查操作程序

1、菌落總數(shù)檢查操作程序1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備1.1稀釋水、刻度吸管、平皿稀釋水：瓶裝PH值7.0無(wú)菌生理鹽水，塞上膠塞，按高壓蒸氣滅菌操作程序，121℃濕熱滅菌30分鐘。取0.2ml、1ml、5ml、10ml刻度吸管、平皿置于金屬容器中，140℃干熱滅菌2小時(shí)。1.1.1培養(yǎng)基準(zhǔn)備：平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基以上實(shí)驗(yàn)所需干粉培養(yǎng)基均由中檢所提供，分別按說(shuō)明加適量水加熱溶解后，塞上膠塞，濕熱滅菌30分鐘備用。1.1.2無(wú)菌衣將無(wú)菌衣、頭罩、口罩、乳膠手套疊好

2、，置于無(wú)菌衣袋中，濕熱滅菌30分鐘。1.2無(wú)菌室及操作臺(tái)的準(zhǔn)備用0.1%的新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液將操作臺(tái)，天花板，墻壁，地面擦洗一遍，同時(shí)將操作臺(tái)用0.1%新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液擦洗一遍。將實(shí)驗(yàn)所需物品通過(guò)傳遞窗移入無(wú)菌室，打開(kāi)空氣凈化系統(tǒng)，打開(kāi)紫外燈，殺菌0.51個(gè)小時(shí)。2實(shí)驗(yàn)操作2.1進(jìn)入無(wú)菌室更衣間，用0.1%新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液消毒手及腕部至少一分鐘，戴上頭罩、口罩，穿好無(wú)菌衣及無(wú)菌手套后，進(jìn)入無(wú)菌室，開(kāi)始實(shí)

3、驗(yàn)操作。菌落總數(shù)操作程序選擇23個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取1ml分別放入無(wú)菌皿內(nèi)2.2.3用1ml無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1ml，沿管壁緩慢注于盛有9ml稀釋液的無(wú)菌試管中，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。2.2.4按以上操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1ml無(wú)菌吸管或吸頭。2.2.5根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇23個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣

4、品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1ml樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1ml空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。2.2.6及時(shí)交1520ml冷卻至46的平析計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。2.2.7待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃1℃培養(yǎng)482小時(shí)。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基，凝固后翻轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)。2.3菌落計(jì)數(shù)2.3.1

5、做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察。必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。2.4菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告2.4.1平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)；其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而