電化學發(fā)光原理及儀器ppt課件

1、Elecsys 原理及儀器,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光檢測項目,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光檢測項目,技術創(chuàng)新領先的免疫檢測新技術－ECL,放免,酶免熒光免疫化學發(fā)光,電化學發(fā)光,1960‘S,1970~80‘S,2000‘S,1，抗體技術的革命，從使用多克隆抗體向使用單克隆抗體轉變2，

2、從手工操作向全自動分析儀的轉變3，從液相放射免疫技術向均相和固相免疫分析技術的轉變,1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫測定的敏感度，這種標記免疫測定開拓了醫(yī)學檢驗的新領域 。,缺點 半衰期短，試劑貨架期不長。標記物不斷變化，試劑批間、批內(nèi)變化大，標準曲線不能保存。反應時間長，操作步驟很難自動化。使用放射性核素，對人體有一定的危害性。分析的限度為 10 mol/ml 或 10 g

3、/ml。,在一定時期內(nèi)曾被采用，正在被逐步取代。,放射免疫測定法,1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫測定方法（ELISA），這種非放射標記免疫測定在臨床檢驗，特別是感染性疾病的診斷中取得了廣泛應用。,酶免疫測定法,缺點 試劑制備困難。操作步驟復雜，耗時長。影響因素多，質(zhì)量控制難以保證。最后測定的是顏色的光密度，其精密度和敏感性不如發(fā)光免疫技術。,各實驗室操作不規(guī)范，質(zhì)量難以保證。有學者認為ELISA技術已逐

4、步走向退化，可能會逐步退出臨床實驗室。,化學發(fā)光免疫測定法出現(xiàn)于20世紀90年代初。由于最后測定的是光子的量，不但對檢測者無害，其敏感度和精密度均優(yōu)于RIA，而且試劑較穩(wěn)定，并可進行全自動分析。,化學發(fā)光免疫測定法,采用標記催化酶（如辣根過氧化物酶）或化學發(fā)光分子（如魯米諾）的方法，其化學反應一般不穩(wěn)定，為間斷的、閃爍性發(fā)光，而且在反應過程中易發(fā)生裂變，導致反應結果不穩(wěn)定。檢測時需對結合相與游離相進行分離，操作步驟多。反應原理相對落

5、后。,缺點,電化學發(fā)光免疫技術,電化學發(fā)光免疫測定法（ECLIA）發(fā)展于 1996年，它在發(fā)光反應中加入了電化學反應，是繼放射免疫、酶免疫、化學發(fā)光免疫測定之后的新一代標記免疫測定技術，是電化學和免疫測定相結合的產(chǎn)物。,世界公認的 最先進 的臨床免疫檢測技術,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光檢測項目,Elecsys系列全自動免疫分析儀,1996年德國寶靈

6、曼公司推出Elecsys 2010系統(tǒng)世界上第一臺 應用電化學發(fā)光技術的全自動免疫分析儀1998年羅氏公司收購寶靈曼公司2001年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊E 170 羅氏是全球唯一 應用電化學發(fā)光免疫技術制造儀器的廠商2006年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊e6012007年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊e411,ECL 2010 disk,E170,ECL 2010 rack,e601,Elecsys系列全自動免疫分析儀,e41

7、1 disk,e411 rack,電化學發(fā)光反應的原理三聯(lián)吡啶釕和三丙胺在電極表面發(fā)生的電化學發(fā)光反應,電化學發(fā)光原理,底物：三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)2+3] N羥基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA),在電極陽極表面，以上兩種電化學活性物質(zhì)同時失去電子發(fā)生氧化反應，2價的[Ru(bpy)2+3] 標記物被氧化成3價的[Ru(bpy)3+3] 的標記物，TPA被氧化成陽離子自由基TPA+* ， TPA+* 很不穩(wěn)定，

8、自發(fā)地失去一個質(zhì)子而形成自由基TPA* ，其為強還原劑，將一個電子給3價的[Ru(bpy)3+3] ，使其成為激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3衰減時發(fā)射一個波長620nm的光子，重新形成基態(tài)的Ru(bpy)2+3 。這一過程在電極表面周而復始進行，產(chǎn)生許多光子。使得光信號增強。,,Sandwich Principle雙抗夾心法,? large molecular weight

9、 antigens are measured directly proportional measurement, means: low signal = low concentration high signal = high concentration e.g. TSH, CA 15-3 II – assays,雙抗夾心法 & 橋

10、聯(lián)免疫法,,Competitive Principle競爭法,? small molecular weight antigens are measured indirectly proportional measurement, means: high signal = low concentration low signal = high concentrati

11、on e.g. T4, Folate II – assays,競爭法,電化學發(fā)光免疫系統(tǒng)核心原理,電化學發(fā)光,磁性微粒子固相,親和素- 生物素間接包被,流動池檢測系統(tǒng),簡單試劑管理，先進的定標概念,直徑最小– 2.8um表面積大而均一磁性微粒子呈懸浮狀態(tài)使異相反應變成類均相反應加快反應速度提高反應靈敏度,磁性微粒子固相載體的優(yōu)點,專利的鏈霉親和素-生物素包被技術,適用于包被各種化合物，如多肽、脂

12、多糖等。,親和素包被微粒子高效、均一、穩(wěn)定、通用。,鏈霉親和素- 生物素間接包被的優(yōu)勢,生物素結合物與標本液相反應。,生物素- 親和素反應親和力強。,由磁鐵將結合標記Ag-Ab復合物的磁性微粒（結合相）吸附于電極上，游離相被緩沖液沖走；電極表面的電化學發(fā)光的信號檢測完成后，磁鐵移走并使用系統(tǒng)清潔液沖走電極表面的結合標記Ag-Ab復合物的磁性微粒子；實現(xiàn)了結合相與游離相的全自動分離,流動池檢測系統(tǒng),簡單的試劑管理,適用于電化學發(fā)光全自

13、動免疫分析儀各種型號 Elecsys 2010 and the Modular E 1702維條形碼自動輸入全部信息試劑聯(lián)體包 成分獨立 穩(wěn)定好無需配制，打開即用自動開閉試劑瓶蓋，有效地防止揮發(fā)等,電化學發(fā)光試劑極為穩(wěn)定,兩點定標，節(jié)約成本二維條碼系統(tǒng)，信息量大,先進的兩點定標方式,·羅氏研發(fā)部：建筑在參考標準上的 Master calibrator curve：10-12point·每批試劑：Lo

14、t-specific master calibration curve (n = 5 or 6)·客戶端：換批號兩點定標,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光檢測項目,真正的連續(xù)隨機進樣15個試劑通道，帶有冷藏裝置試劑盒自動開/關樣本盤30個樣本位置，樣本架型 75個樣品位，可隨時插入急診條形碼和原始管樣本系統(tǒng)，以及主動樣本識別功能檢測速度：90測試/

15、小時 （真實速度）主動的試劑識別功能彩色液晶觸摸屏具備液面檢測，凝塊/氣泡自動探測功能檢測結果數(shù)據(jù)自動傳送可連接中文數(shù)據(jù)系統(tǒng),Elecsys 2010分析儀系統(tǒng)規(guī)格與參數(shù),真正的連續(xù)隨機進樣18個試劑通道，帶有冷藏裝置試劑盒自動開/關樣本盤30個樣本位置，樣本架型 75個樣品位，可隨時插入急診條形碼和原始管樣本系統(tǒng)，以及主動樣本識別功能檢測速度：86測試/小時 （真實速度）主動的試劑識別功能彩色液晶觸摸屏（鍵盤

16、）具備液面檢測，凝塊/氣泡自動探測功能檢測結果數(shù)據(jù)自動傳送可連接中文數(shù)據(jù)系統(tǒng),e411分析儀系統(tǒng)規(guī)格與參數(shù),170 測試/小時25 個試劑通道, 溫控在 20°C樣本架傳送式進入利用一次性加樣吸頭防范樣本間交叉污染同時在儀器上 1000 個吸頭和 1000 個分析杯在運行過程中可以隨時添加吸頭和分析杯，二維條形碼識別系統(tǒng)試劑包裝100/200個測試，自動開蓋功能最大四個模塊組合在一起與全自動生化分析

17、模塊（D/P）任意組合,E170,cobas e 601,170 測試/小時25 個試劑通道, 溫控在 20°C樣本架傳送式進入利用一次性加樣吸頭防范樣本間交叉污染同時在儀器上 1000 個吸頭和 1000 個分析杯在運行過程中可以隨時添加吸頭和分析杯，二維條形碼識別系統(tǒng)試劑包裝100/200個測試，自動開蓋功能最大2個 e 模塊組合成 ee與生化模塊（c501）組合成 ce，cee，cce,最先進的模塊化

18、設計理念基于智能化流程管理軟件的多模塊組合可一模塊工作，另一待機，便于維修工作在需增加設備時只要添加模塊，減少重復開支生化免疫一體化聯(lián)機同一軌道連接，同一計算機控制所有模塊,e601模塊化設計理念,全新的cobas e library概念,及時得到更新信息電子版試劑說明書電子版定標、質(zhì)控條形碼相關通知遠程診斷服務 軟硬件升級遠程幫助平臺系統(tǒng)信息分析 系統(tǒng)參數(shù)備份,The Core Unit,快速靈活的樣本管理功

19、能,快速靈活的樣本管理功能,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光檢測項目,同行業(yè)中最先進的分析原理專利的電化學發(fā)光分析技術（ECL）,最好的化學發(fā)光標記物-三聯(lián)吡啶釕分子量小，結構簡單?？梢詷擞浻诳乖贵w，核酸等各種分子量，分子結構的物質(zhì)。從而具有最齊全的檢測菜單。三聯(lián)吡啶釕為水溶性，且高度穩(wěn)定的小分子物質(zhì)。保證電化學發(fā)光反應的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲干擾。,

20、最先進的包被技術采用羅氏公司專利的鏈霉親和素-生物素包被技術。鏈霉親和素-生物素是最牢固和特異的結合。保證了牢固的包被效果和特異的檢測結果。,電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢,電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢,特殊的磁性微粒子載體以及分離技術由聚苯乙烯包被的磁性微粒子為載體，直徑僅為2.8um。同類型產(chǎn)品最小提供類均相的反應環(huán)境，增加反應面積，提高反應速度；保證最終檢測結果的高靈敏度；利用磁性分離技術，實現(xiàn)全自動化分析。,與其它幾種標記免疫測定技術

21、相比，電化學發(fā)光具有更多的優(yōu)點：1.        高靈敏度，檢測下限達pmol；2.        線形范圍寬，達7個數(shù)量級；3.        快速，出第一個結果的時間僅需數(shù)分鐘；4.   

22、;     應用范圍廣，可以同樣的靈敏度和線性范圍檢測各種物質(zhì)，包括DNA；5.        試劑穩(wěn)定，無污染和衰變問題；6.        自動化程度高。,免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光儀器性能特點電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學

23、發(fā)光檢測項目,甲狀腺項目腫瘤標志物性激素類 肝炎系列心臟功能貧血診斷指標骨質(zhì)疏松其它項目,Elecsys系列全自動分析儀檢測項目,最齊全的檢測項目菜單,甲 狀 腺 項 目,,TSH 促甲狀腺激素 （查明甲狀腺功能的初篩試驗）T3 三碘甲狀腺原氨酸（作用于靶器官的主要甲狀腺激素）T4 甲狀腺素 （

24、診斷甲亢、甲低）FT3 游離三碘甲狀腺原氨酸FT4 游離甲狀腺素TG 甲狀腺球蛋白 （甲狀腺體完整性的特殊標志物）T－uptake 甲狀腺素結合力 （了解甲狀腺素的結合位點數(shù)）Anti-TG 抗甲狀腺球蛋白抗體（增高見于慢性橋本甲狀腺炎等）Anti-TPO 抗甲狀腺過氧化物酶抗體,腫 瘤 標 志 物,

25、AFP 甲胎蛋白 （原發(fā)性肝癌最特異的腫瘤標志物）CEA 癌胚抗原 （增高多見于結腸癌患者）CA125 糖類抗原125 （最可靠的卵巢癌診斷指標）CA15-3 糖類抗原15-3（主要用于乳腺癌的監(jiān)測和篩選）CA19-9 糖類抗原19-9（胰腺癌敏感性最高的標志物）CA72-4 糖類抗原72-4（胃 腸 道 和 卵 巢 癌 的 腫 瘤

26、標 志 物）,Cyfra21-1非小細胞肺癌抗原NSE 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（小細胞肺癌檢出的陽性率高）PSA 前列腺特異性抗原 （前列腺癌的篩選與早期診斷）Free PSA 游離前列腺特異性抗原S100 S100蛋白質(zhì) (輔助診斷惡性黑色素瘤患者能腦損傷患者),性 激 素 類,Cortisol 皮質(zhì)醇 （

27、最主要的糖皮質(zhì)類固醇）Estradiol 雌二醇 （生物活性最強的雌激素）FSH 促卵泡生成激素LH 促黃體生成激素HCG＋β 人絨毛膜促性腺激素 + β 亞單位HCG STAT 總HCG （2010及e411）,Progesterone 孕酮Prolactin 泌乳素Testosterone

28、 睪酮DHEA-S 硫酸脫氫雄甾酮（輔助診斷多毛癥和女子男性化）SHBG 性激素結合球蛋白,,協(xié)同調(diào)節(jié)和刺激性腺的發(fā)育和功能,肝 炎 系 列,HBsAg II 乙肝表面抗原（檢測HBV感染的首選標志物）Anti-HBs 乙肝表面抗體HBeAg 乙肝e抗原 （陽性提示大量病毒存在）Anti-Hbe

29、 乙肝e抗體Anti-HBc 乙肝核心抗體Anti-HBc IgM 乙肝核心抗體IgM HBsAg Confirmatory 乙肝表面抗原確證實驗Anti-HAV 甲肝抗體Anti-HAV IgM 甲肝抗體IgM,,心 臟 功 能,,CK-MB 肌酸肌酶同功酶（診斷心肌缺血性損傷的重要指標）Digoxin

30、 地高辛Digitoxin 洋地黃Myoglobin 肌紅蛋白 （診斷急性心肌梗死的的重要指標）Troponin T 肌鈣蛋白T （心肌損傷特異的標志）pro-BNP 腦利鈉肽前體（反映心衰的標志物）,貧 血 診 斷 指 標,Ferritin 鐵蛋白B12

31、 維生素B12 （輔助診斷巨幼細胞性貧血）Folate 葉酸 （輔助診斷巨幼細胞性貧血）RBC Folate 紅細胞內(nèi)葉酸 （真實反映組織中葉酸的含量）,骨 質(zhì) 疏 松,,Β-CrossLaps β-膠原降解產(chǎn)物N-Osteocalcin N端骨鈣素PTH 甲狀旁腺激素P1NP

32、總I 型膠原氨基端延長肽,其 它 項 目,IgE 免疫球蛋白E HIV combi 艾滋病抗原抗體聯(lián)合試驗ACTH 促腎上腺皮質(zhì)激素INSULIN 胰島素C-PEPTIDE C肽,Elecsys Rubella lgG Elecsys Rubella

33、lgMElecsys Toxo lgGElecsys Toxo lgMElecsys CMV lgG Elecsys CMV lgM,TORCH,用于孕婦的產(chǎn)前檢查,1、Elecsys? Anti-HCV 2、21三體（唐氏綜合癥）評估項目及軟件 Elecsys PAPP-A Elecsys free HCG 用于輔助診斷懷孕頭三個月的胎兒

34、是否有患唐氏綜合癥的危險 3、Elecsys? IL -6 能更早的反映患者的急性炎癥，如膿血癥 4、Elecsys? Anti-CCP 有利風濕性關節(jié)炎的診斷5、Elecsys? Vitamin D 反映的是骨代謝狀況6、Elecsys? TSHR-Ab 檢測人體甲狀腺組織中是否存在抗TSH受體的抗體，臨床上可 用于鑒別診斷甲狀腺機能亢進癥等疾病7、Elecsys? sCD40L 反映心血管疾

35、病中血小板，凝血細胞的聚集能力，血栓癥發(fā)病的 危險性 8、Elecsys? PLGF 檢測正常妊娠及妊娠高血壓綜合征(妊高征)患者血清胎盤生長因子 (PlGF)的水平;妊娠過程中,PlGF對胎盤血管的形成有重要調(diào)節(jié)作用,PlGF的下降與妊 高征發(fā)病有關. 9、Elecsys? sFLT1 可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1,子癇前期患者胎盤組織中sFlt-1蛋白 過度表達,可引起循環(huán)