枸杞多糖對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：采用高糖高胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，通過(guò)觀察不同濃度的枸杞多糖（lyceum barbarum polysaccharide，LBP）對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的影響，探討其改善胰島素抵抗可能的分子機(jī)制，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)、利用枸杞多糖提供理論依據(jù)，也為將來(lái)枸杞多糖治療2型糖尿病提供科學(xué)依據(jù)，具有重要意義。
　　方法：采用高糖高胰島素處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，通過(guò)葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)判斷模型

2、是否建立、噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)不同濃度的LBP對(duì)HepG2細(xì)胞活性的影響，選擇三個(gè)合適的濃度、確定藥物作用時(shí)間用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)不同濃度LBP對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響。比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛（malondialdehyde， MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量；Westen-Blot法測(cè)定胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)蛋白（IRS-

3、2、PI3K、Akt、GLUT2）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.枸杞多糖對(duì)HepG2細(xì)胞活性的影響：LBP處理HepG2細(xì)胞24h和48h后，低濃度（100，300μg/ml）枸杞多糖不影響細(xì)胞活性；而高濃度（500、1000、3000、5000μg/ml）枸杞多糖呈濃度依賴性抑制HepG2細(xì)胞活性。當(dāng)處理時(shí)間延長(zhǎng)至72h時(shí)，高濃度的枸杞多糖對(duì)HepG2細(xì)胞活性的抑制作用愈加明顯，且呈劑量依賴效應(yīng)，與對(duì)照組（24h,0μg/ml）相

4、比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因此，為了排除枸杞多糖對(duì)細(xì)胞活力的影響，本實(shí)驗(yàn)選擇30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml分別作為低濃度枸杞多糖組（L-LBP）、中濃度枸杞多糖組（M-LBP）和高濃度枸杞多糖（H-LBP組）的濃度值，處理細(xì)胞時(shí)間選擇48h。
　　2.枸杞多糖對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響：與正常對(duì)照組相比，IR模型組細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明Hep

5、G2細(xì)胞胰島素抵抗模型建立成功。與IR模型組相比，高濃度和中濃度的LBP顯著提高了胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而低濃度LBP對(duì)HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗量無(wú)顯著影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與羅格列酮組相比，高、低濃度LBP組葡萄糖消耗量顯著降低（P＜0.05），中濃度LBP組葡萄糖消耗量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　3.枸杞多糖對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞MDA含量和S

6、OD活力的影響：與正常對(duì)照組相比，IR模型組細(xì)胞MDA含量顯著升高，SOD活力顯著降低（P＜0.05）。與IR模型組相比，高、中濃度LBP組細(xì)胞MDA含量顯著降低（P＜0.05）；而低濃度LBP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；高濃度、中濃度和低濃度LBP組細(xì)胞SOD活力均顯著升高（P＜0.05）。與羅格列酮組相比，中濃度LBP組MDA含量顯著降低（P＜0.05）；高、中濃度LBP組SOD活力顯著升高（P＜0.05）。
　　4.

7、枸杞多糖對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)的影響：與正常對(duì)照組相比，IR模型組IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與IR模型組相比，高、中濃度LBP組IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而低濃度LBP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與羅格列酮組相比，高、中、低濃度LBP組IRS-