氣道內(nèi)微量霧化機(jī)對質(zhì)粒DNA完整性和基因轉(zhuǎn)染效率的影響.pdf

1、一、背景：
　　肺部的一些疾病給患者帶來長期的困擾，如哮喘、a1-抗胰蛋白酶缺乏的肺部表現(xiàn)，影響患者的生活質(zhì)量；肺癌、囊性纖維化累及肺部，危及患者的生命。這些疾病都與基因有關(guān)，將基因作為藥物進(jìn)行治療，給治愈這些疾病帶來了希望和新的方法。基因治療最初是將正?；?qū)爰?xì)胞，之后逐漸出現(xiàn)將重組基因、RNA導(dǎo)入細(xì)胞。肺的結(jié)構(gòu)和呼吸功能有利于進(jìn)行霧化治療。向肺內(nèi)霧化基因藥物，對肺部基因有關(guān)的疾病進(jìn)行基因治療，是一種較好的治療方法。但是向肺內(nèi)

2、霧化基因藥物進(jìn)行霧化基因治療的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用受多方面因素的制約如：基因藥物昂貴；載體有毒性、免疫、炎癥反應(yīng)、跨膜轉(zhuǎn)染效率不高；霧化機(jī)對基因藥物存在浪費(fèi)和完整性破壞，霧化效率不高等多種因素使霧化基因治療的效率不高。本文介紹一種新型霧化機(jī)，對基因藥物損耗小，不破壞基因藥物完整性，從霧化設(shè)備方面提高霧化基因治療效率，為霧化基因治療提供了一種合適的工具。
　　二、目的：
　　探索新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)對質(zhì)粒DNA（Plasmid D

3、NA,pDNA）完整性和對整體動物基因轉(zhuǎn)染效率的影響。
　　三、方法：
　　1.研究新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)對pDNA破壞程度
　　分別向新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)和目前臨床普遍使用的機(jī)械噴射式霧化機(jī)的加藥池內(nèi)加入2mlpDNA（20μg/ml），在開始霧化后第1min、3min、5min分別收集兩種霧化機(jī)嘴處的霧化液滴，用瓊脂糖凝膠電泳觀察比較質(zhì)粒的完整性。
　　2.研究新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)在整體動物上對基因轉(zhuǎn)染效率的影

4、響
　　分別用新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)和目前臨床普遍使用的機(jī)械噴射式霧化機(jī)，給大鼠霧化經(jīng)多聚乙烯亞胺（polyethylenimine，PEI）修飾的相同量的綠色熒光蛋白質(zhì)粒(plasmid DNA of green fluorescent protein gene,pEGFP)3.3μg（PEI/pEGFP），24時后提取動物肺組織mRNA后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，用Realtime PCR及瓊脂糖凝膠電泳觀察分析綠色熒光蛋白（green fl

5、uorescent protein,GFP）的mRNA表達(dá)情況。
　　四、結(jié)果：
　　1.新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)在霧化第1分鐘、第3分鐘、第5分鐘后完整的質(zhì)粒比例分別為（99.6±0.7）％、（100±1.2）％、（99.6±0.7）％，與未霧化對照相比（P＞0.05，n=3），無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，新型霧化機(jī)對質(zhì)粒破壞性可以忽略。臨床常用的噴射式霧化機(jī)在相同時間段內(nèi)完整的質(zhì)粒比例分別為（70.3±1.5）％、（49.3±1.5）％、

6、（32.7±0.6）％。與未霧化對照相比（P＜0.05,n=3）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且隨霧化時間增加臨床常用的噴射式霧化機(jī)對質(zhì)粒的完整性破壞程度逐漸增加。
　　2.新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)的基因轉(zhuǎn)染效率高于臨床普遍使用的機(jī)械噴射式霧化機(jī)轉(zhuǎn)染效率的382.1±101.1倍（P＜0.01,n=3）。
　　五、結(jié)論：
　　1.新型氣道內(nèi)微量霧化機(jī)對質(zhì)粒幾乎沒有破壞性。
　　2.新型霧化機(jī)能顯著增加霧化吸入基因轉(zhuǎn)染治療效率。為動