微生物學(xué)試驗(yàn)教程

1、內(nèi)容提要內(nèi)容提要《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》是配合武漢大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)編的《微生物學(xué)》一書的實(shí)驗(yàn)教材。第二版做了較大修改，增添了許多新技術(shù)和方法，實(shí)驗(yàn)由原來的40個增至63個，并按類規(guī)納成15個部分。每一部分冠以綜合性說明，簡單介紹該部分內(nèi)容及其在微生物學(xué)工作中的作用。第二版仍著重微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作和技能訓(xùn)練。為方便教學(xué)，每一實(shí)驗(yàn)基本上仍按照目的要求、基本原理、器材、操作步驟及實(shí)驗(yàn)報告（包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果和思考題）五部分。書后附有染色液、培養(yǎng)基、試劑和

2、溶液的配制方法、本書使用的菌種名稱，微生物學(xué)中常用的計(jì)量單位及主要參考書目。第二版實(shí)驗(yàn)內(nèi)容較多，各?？筛鶕?jù)具體條件酌情選做。第一版前言第一版前言《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》一書是根據(jù)1977年10月成都綜合性大學(xué)生物類教材會議制定的大綱編寫的。在編寫過程中，為配合武漢大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)編的《微生物學(xué)》教材，在內(nèi)容上有所增加和修改。本書共有實(shí)驗(yàn)40個，內(nèi)容較多，其中包括與《微生物學(xué)》相配合、印證理論以及進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)所需的基本操作和技能的訓(xùn)練兩大部分。各

3、?？筛鶕?jù)具體條件酌情選做。本書為方便教學(xué)，每一實(shí)驗(yàn)基本上都按目的要求、基本原理、器材、操作步驟及結(jié)果與思考題等五個部分來編寫的，各實(shí)驗(yàn)所用染料、培養(yǎng)基、溶液與懸液等的配制均列在附錄內(nèi)。由于編者水平所限，在取材、實(shí)驗(yàn)方法和編排等方面肯定有不少缺點(diǎn)與錯誤，希望讀者批評指正。在編寫過程中承武漢大學(xué)生物系微生物教研室基礎(chǔ)微生物學(xué)教學(xué)小組的大力支持，武漢大學(xué)生物系陳寶聯(lián)同志繪制插圖，在此一并表示感謝。范秀容沈萍第二版前言第二版前言《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》

4、第一版自1980年出版以來已有七八年了，在此期間，經(jīng)過多次印刷，印數(shù)已達(dá)十余萬冊。它在微生物學(xué)的教學(xué)和穩(wěn)定教學(xué)秩序方面起了積極的作用，但是也存在不少缺點(diǎn)，加上近年來微生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，因此我們進(jìn)行了出版第二版的修訂工作。修訂內(nèi)容和特點(diǎn)如下：1將繁多的實(shí)驗(yàn)按類歸納成15個部分，以求條理清楚，概念分明。每一部分冠以綜合性說明，主要簡單介紹該部分的內(nèi)容，闡述其在整個微生物學(xué)工作中的作用等。再在每一部分選擇有代表性的重點(diǎn)，列出實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行操作。

5、2繼續(xù)著重微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作和技能的訓(xùn)練。3實(shí)驗(yàn)內(nèi)容做如下調(diào)整：(1)為了加強(qiáng)學(xué)生對微生物及其應(yīng)用和無菌概念重要性的認(rèn)識，以及對實(shí)驗(yàn)工具的質(zhì)量要求和洗滌方法的了解，增加了“微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的器皿”、“環(huán)境中的微生物”和“食品微生物學(xué)”等部分。(2)使一些領(lǐng)域的內(nèi)容更加全面，例如在“顯微鏡的結(jié)構(gòu)、性能和使用方法”部分增加了相差顯微鏡和電子顯微鏡；“微生物的純培養(yǎng)”部分增加了厭氧培養(yǎng)；微生物的遺傳方面增加了藥物抗性菌的分離和細(xì)菌的接合

6、作用等實(shí)驗(yàn)。(3)適當(dāng)增加新技術(shù)的介紹，例如生化反應(yīng)中的微量簡易診檢系統(tǒng)；菌種保藏中的液氮冷凍保藏法；水的微生物學(xué)檢查中增加了濾膜法等。(4)此外，在基本操作訓(xùn)練方面集中介紹了動物的幾種不同途徑的注射方法。(5)由于“環(huán)境中的微生物”包括了空氣中微生物的檢查，故沒有再單獨(dú)設(shè)實(shí)驗(yàn)，此外還刪去了“巴斯德效應(yīng)”實(shí)驗(yàn)。1試管（testtube）微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用玻璃試管，其管壁必須比化學(xué)實(shí)驗(yàn)室用的厚些，這樣在塞棉花塞時，管口才不會破損。試管的形

7、狀要求沒有翻口（圖Ⅰ1，A），不然，微生物容易從棉塞與管口的縫隙間進(jìn)入試管（圖Ⅰ1，B）而造成污染。此外，現(xiàn)在有不用棉塞而用鋁制或塑料制的試管帽（圖Ⅰ1，C），若用翻口試管也不便于蓋試管帽。有的實(shí)驗(yàn)要求盡量減低蒸發(fā)試管內(nèi)的水分，則需使用螺口試管（圖Ⅰ1，D），蓋以螺口膠木或塑料帽。試管的大小可根據(jù)用途的不同，準(zhǔn)備下列三種型號。（1）大試管（約18180mm）可盛倒培養(yǎng)皿用的培養(yǎng)基；亦可作制備瓊脂斜面用（需要大量菌體時用）。（2）中試管（

8、約13—15100—150mm）盛液體培養(yǎng)基或做瓊脂斜面用，亦可用于病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)。（3）小試管（10—12100mm）一般用于糖發(fā)酵試驗(yàn)或血清學(xué)試驗(yàn)，和其他需要節(jié)省材料的試驗(yàn)2德漢氏試管（Durhamtube）觀察細(xì)菌在糖發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)產(chǎn)氣情況時，一般在小試管內(nèi)再套一倒置的小套管（約636mm）（圖I2），此小套管即為德漢氏試管，又稱發(fā)酵小套管。3吸管（又稱移液管，pipette）（1）玻璃吸管（glasspipette）微生

9、物學(xué)實(shí)驗(yàn)室一般要準(zhǔn)備1、5、10ml的刻度玻璃吸管（圖I3，A）。與化學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用的不同，其刻度指示的容量往往包括管尖的液體體積，亦即使用時要注意將所吸液體吹盡，故有時稱為“吹出”吸管。市售細(xì)菌學(xué)用吸管，有的在吸管上端刻有“吹”字。除有刻度的吸管外，有時需用不計(jì)量的毛細(xì)吸管，又稱滴管（圖Ⅰ3，B），來吸取動物體液和離心上清液以及滴加少量抗原、抗體等。（2）活塞吸管（pistonpipette）主要用來吸取微量液體，故又稱微量吸液器或微量

10、加樣器。其外形和結(jié)構(gòu)如圖Ⅰ4，除塑料外殼外，主要部件有按鈕、彈簧、活塞和可裝卸的吸嘴。按動按鈕，通過彈簧使活塞上下活動，從而吸進(jìn)和放出液體。其特點(diǎn)是容量固定，使用時不用觀察刻度，操作方便、迅速。國內(nèi)產(chǎn)品一般每個活塞吸管固定一種容量，分別有5、10、20、25、50、100、200、500、1000μl等不同容量。而精制的活塞吸管每個在一定的范圍內(nèi)可調(diào)節(jié)幾個容積，例如在5—25μl的范圍內(nèi)，可調(diào)節(jié)5、10、15、20、25μl五個不同的量

11、，使用時按需要調(diào)節(jié)，但當(dāng)調(diào)節(jié)固定后，每吸一次，容量仍是固定的。用畢只需調(diào)換吸嘴或?qū)⑽煜磧?，消毒后再行使用?；钊苁菄?0年代后半期才開始生產(chǎn)與應(yīng)用的，近年來國內(nèi)亦日益廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)和使用同位素等的科學(xué)實(shí)驗(yàn)中。4培養(yǎng)皿（petridish）常用的培養(yǎng)皿（圖Ⅰ5），皿底直徑90mm，高15mm。培養(yǎng)皿一般均為玻璃皿蓋，但有特殊需要時，可使用陶器皿蓋，因其能吸收水分，使培養(yǎng)基表面干燥，例如測定抗生素生物效價時，培養(yǎng)皿不能倒置培養(yǎng)，則用

12、陶器皿蓋為好。在培養(yǎng)皿內(nèi)倒入適量固體培養(yǎng)基制成平板，用于分離、純化、鑒定菌種、微生物計(jì)數(shù)以及測定抗生素、噬菌體的效價等。5三角燒瓶（Erlenmeyerflask）與燒杯（beaker）三角燒瓶有100、250、500、1000ml等不同的大小，常用來盛無菌水、培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵等。常用的燒杯有50、100、250、500、1000ml等，用來配制培養(yǎng)基與藥品。6注射器（inject）一般有1、2、5、10、20、50ml等不同容量的注射