特發(fā)性脊柱側(cè)凸遺傳流行病學(xué)調(diào)查及染色體19p13.3區(qū)域內(nèi)候選易感基因sh3gl、cadd45b、fgf22外顯子測(cè)序分析

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文特發(fā)性脊柱側(cè)凸遺傳流行病學(xué)調(diào)查及染色體19P13.3區(qū)域內(nèi)候選易感基因SH3GL、CADD45B、FGF22外顯子測(cè)序分析姓名：楊滔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（骨科）指導(dǎo)教師：許建中201205第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文G A D D 4 5 B ，F(xiàn) G F 2 2 為I S 候選基因，設(shè)計(jì)以家系為基礎(chǔ)的“病例同胞對(duì)對(duì)照，病例親屬對(duì)對(duì)照”研究方案，并根據(jù)S H 3 G L l ，G A D D 4 5 B ，

2、F G F 2 2 基因的外顯子設(shè)計(jì)引物對(duì)進(jìn)行P C R擴(kuò)增、克隆和測(cè)序，進(jìn)行“同胞對(duì)、親屬對(duì)”之間的序列比對(duì)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析。研究方法：1 ．遺傳流行病學(xué)調(diào)查：采用自行設(shè)計(jì)的I S 遺傳流行病學(xué)調(diào)查表，由經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查員對(duì)先證者家系進(jìn)行調(diào)查，繪制家系譜。調(diào)查方法為門診、病房面對(duì)面詢問和電話詢問相結(jié)合( 先告知調(diào)查目的征得知情同意) 。調(diào)查對(duì)象為A I S 先證者、父親和母親。詳細(xì)調(diào)查先證者的一級(jí)親屬有：先證者的同胞、雙親和先證者的

3、子女；先證者的二級(jí)親屬有：先證者祖父母、外祖父母、姨、姑、舅和叔伯：三級(jí)親屬有：先證者的表兄妹、堂兄妹。流行病學(xué)常規(guī)調(diào)查內(nèi)容有：一般情況、有無脊柱側(cè)凸病史。對(duì)懷疑為易感者和A I S 受累者的家系成員，需要行臨床物理檢查確定：包括脊柱視診、A d a m 彎腰試驗(yàn)以及脊柱正位x 線片檢查。A I S 的診斷標(biāo)準(zhǔn)：受試者直立冠狀位x 線片檢查：如果C o b b 角> 1 0 0為受累者，年齡小于1 4 歲的表型正常的家系成員，統(tǒng)計(jì)

4、時(shí)屬于未發(fā)病的親屬。遺傳流行病學(xué)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：家族聚集性分析使用樣本率與總體率比較U 檢驗(yàn)，A I S 遺傳度用F a l c o n e r 回歸法估算。2 ．定位候選克隆篩查易感基因，我們?cè)谌旧w1 9 p 1 3 ．3 區(qū)域內(nèi)，篩選出D 1 9 S 2 1 6標(biāo)志附近與組織結(jié)構(gòu)、功能有關(guān)的S H 3 G L l ，G A D D 4 5 B ，F(xiàn) G F 2 2 為A I S 候選基因，設(shè)計(jì)以家系為基礎(chǔ)的“病例同胞對(duì)對(duì)照，病例親屬

5、對(duì)對(duì)照”研究方案，并根據(jù)S H 3 G L l ，G A D D 4 5 B ，F(xiàn) G F 2 2 基因的外顯子設(shè)計(jì)引物對(duì)進(jìn)行P C R 擴(kuò)增、克隆和測(cè)序，進(jìn)行“同胞對(duì)、親屬對(duì)”之間的序列比對(duì)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析。研究結(jié)果：1 、遺傳流行病學(xué)的研究調(diào)查結(jié)果：成功設(shè)計(jì)A I S 遺傳流行病學(xué)調(diào)查表，對(duì)2 1 4 個(gè)家系展開遺傳流行病系統(tǒng)調(diào)查。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果：家系成員A I S 發(fā)病年齡在3 “ ～2 0 歲，7 8 ．9 1 ％在1 0 -

6、 - 一1 4 歲之間，平均1 1 ．8 歲。男：女= 1 ：2 ．5 9 ，女性發(fā)病高于男性。調(diào)查家系總發(fā)病率1 1 ．7 4 ％。A I S 一級(jí)親屬的發(fā)病率1 0 ．0 1 ％> 二級(jí)親屬的發(fā)病率2 ．5 5 ％> - - 級(jí)親屬的發(fā)病率1 ．0 4 ％。用F a l c o n e r 閾值法計(jì)算I s 遺傳度：A I S 一級(jí)親屬遺傳度砰為( 7 7 ．6 8±1 0 ．3 9 ) ％，二級(jí)親屬遺傳度礙為

7、( 6 9 ．8 9 ±3 ．1 4 ) ％，三級(jí)親屬遺傳度瑤為( 6 2 ．1 4 ±1 1 ．9 2 ) ％。一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)親屬的遺傳度1 1 2 的加權(quán)均值砰礙瑤為( 4 9 ．1 7 ±2 ．9 2 ) ％。2 、候選基因序列對(duì)比分析：候選基因S H 3 G L l ，G A D D 4 5 B ， F G F 2 2 中的外顯子成功克隆及擴(kuò)增。S H 3 G L l 基因包括1 0 個(gè)外顯子，各