外泌體提取的具體步驟及方法

1、外泌體提取的具體步驟及方法 外泌體提取的具體步驟及方法外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)， 現(xiàn)今，其特指直徑在 40-100nm 的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體， 經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、腫瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、 腫瘤的生長與遷移、 組織損傷的修復等生理病理上起著

2、重要的作用。 同時， 不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。1983 年，外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中 被發(fā)現(xiàn)， 1987 年Johnstone 將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。 其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體， 經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊

3、液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡， 參與細胞間通訊， 對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細胞因子、生長因子）以及功能性的 mRNAs、miRNAs 等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、 促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過程， 與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外

4、泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應用價值，一方在超速離心力作用下， 使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在 1.13-1.19g/ml 的密度范圍富集。 此法獲得的外泌體純度較高， 但步驟繁瑣， 耗時。3. 超濾離心由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體， 大于一般蛋白質(zhì)， 利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離， 便可獲得外泌體。超濾離心法簡單