生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用試劑對(duì)抗原抗體反應(yīng)影響及可能造成的實(shí)驗(yàn)信息丟失和錯(cuò)誤的定量分析.pdf

1、目的：
　　對(duì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)Western Blot中常用試劑SDS及免疫組織化學(xué)技術(shù)組織前處理過程和乙醇對(duì)抗原、抗體活性及DNA影響進(jìn)行定量分析，間接反映其對(duì)抗原抗體反應(yīng)可能造成的實(shí)驗(yàn)信息的丟失和錯(cuò)誤，并試圖尋找替代試劑。
　　方法：
　　1、采用雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，通過觀察沉淀線及確定抗原效價(jià)定量分析SDS處理血清后對(duì)血清抗原的影響。
　　2、采用免疫散射比濁技術(shù)，定量分析SDS處理血清后對(duì)IgA、IgM、IgG抗

2、原的影響。
　　3、采用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，定量分析SDS處理乙肝表面抗原陽(yáng)性血清后對(duì)乙肝表面抗原的影響。
　　4、采用免疫固定電泳技術(shù)，分析SDS處理血清后對(duì)免疫球蛋白抗原結(jié)構(gòu)的影響。
　　5、采用凝集實(shí)驗(yàn)，通過比較凝集效價(jià)及凝集強(qiáng)度定量分析免疫組織化學(xué)組織前處理過程和所應(yīng)用試劑處理顆粒型抗原后對(duì)顆粒型抗原的影響。
　　6、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，定量分析SDS及乙醇處理乙肝表面抗體陽(yáng)性血清后對(duì)乙肝表面抗體的影響；定

3、量分析SDS對(duì)不同類型患者傷寒及卵清抗體的影響有無(wú)差異。
　　7、采用熒光定量PCR技術(shù)，將DNA模板經(jīng)SDS及乙醇處理，通過對(duì)GAPDH及CRP基因的擴(kuò)增，比較Ct值，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組Ct值之差，即△Ct值，及抑制率，定量分析SDS及乙醇對(duì)DNA的影響。
　　8、通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定SDS及十二烷基麥芽糖苷（DDM）對(duì)乙肝表面抗體及DNA的影響，并進(jìn)行比較，探討DDM在蛋白質(zhì)提取時(shí)，對(duì)SDS的替代

4、作用。
　　結(jié)果：
　　1、雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)照組抗原效價(jià)為1:256，SDS37℃實(shí)驗(yàn)組抗原效價(jià)為1:4，SDS100℃實(shí)驗(yàn)組抗原已破壞，結(jié)果無(wú)沉淀線產(chǎn)生。
　　2、免疫散射比濁實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SDS37℃實(shí)驗(yàn)組IgA、IgM、IgG較對(duì)照組略有上升，SDS100℃實(shí)驗(yàn)組IgA、IgG抑制率在90%以上，IgM為30%。
　　3、電化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SDS37℃實(shí)驗(yàn)組乙肝表面抗原抑制率為70%，SD

5、S100℃實(shí)驗(yàn)組為96%。
　　4、免疫固定電泳技術(shù)結(jié)果顯示：經(jīng)SDS處理后，免疫球蛋白抗原結(jié)構(gòu)被破壞。
　　5、凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：免疫組織化學(xué)技術(shù)組織前處理過程對(duì)抗原的抑制率為72.2%。各試劑單獨(dú)處理抗原與對(duì)照組相比結(jié)果為：75%以上的高濃度乙醇對(duì)抗原活性的抑制率約為70%，甲醛抑制率約為20%，二甲苯約為10%。
　　6、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示：SDS對(duì)乙肝表面抗體的半數(shù)抑制濃度為0.92%(32mmol/L)

6、；30%乙醇對(duì)HBsAb無(wú)明顯抑制作用；0.1%SDS對(duì)傷寒抗體及卵清抗體具有一定的抑制作用，但是在對(duì)ICU患者與健康體檢者及不同年齡組健康體檢者之間對(duì)這兩種抗體的抑制作用無(wú)明顯差異。
　　7、熒光定量PCR技術(shù)結(jié)果顯示：SDS及乙醇處理DNA模板后，GAPDH及CRP擴(kuò)增的Ct值隨SDS及乙醇濃度的增加而增加，0.05%(1.74mmol/L) SDS處理后，無(wú)擴(kuò)增曲線。
　　8、SDS及DDM對(duì)乙肝表面抗體的半數(shù)抑制濃度