超敏pcr宣講張忠新

1、,高靈敏度病毒載量檢測在肝炎診療中的意義張忠新,HBV 感染是全球性衛(wèi)生問題,33% 的人在一生中會感染HBV;成年感染者中5%-10%會轉為慢性乙肝, 全球約有3.5億慢性HBV感染者; 每年,有100萬人死于與乙型肝炎相關的肝硬化或者肝癌;=> 每30s 奪走一個生命 感染率最高的區(qū)域在亞洲,非洲.,Lavanchy. J Viral Hepat 2004; World Health Organization,

2、 2008; Elgouhari, Cleve Clin J Med 2008,不同的標志物提供不同的診斷以及治療監(jiān)控的信息,Modified from Pawlotsky et al. Gastroenterol 2008,慢性乙型肝炎,干擾素或口服核苷（酸）類似物,口服核苷（酸）類似物或干擾素,觀察，如ALT升高，或肝組織炎癥壞死≥G2,或纖維化≥S2,無肝硬化,有肝硬化,HBeAg+HBV DNA≥20000 IU/

3、mL,HBeAg-HBV DNA≥2000 IU/mL,ALT≥2ULN,ALT<2ULN,ALT≥2ULN,失代償期,代償期,HBeAg+HBV DNA≥2000 IU/mL,HBeAg-HBV DNA≥200 IU/mL,HBV DNA可檢測到,口服核苷（酸）類似物,中國慢性乙型肝炎防治指南（2010版）,高靈敏度HBV DNA檢測能更準確判斷治療起點,啟動治療,<60 IU/mL完全應答,>2000

4、 IU/mL不充分應答,60-2000 IU/mL部分應答,Week 12: 鑒別原發(fā)性無應答,Week 24: 療效早期預測,,Keeffe et al Clin Gastroenterol Hepatol 2007,高靈敏度HBV DNA檢測能更準確判斷應答情況,QL=檢測下限 (聚合酶鏈反應 (PCR)-檢測不到 <300 copies/mL 用 COBAS® Amplicor?) ?從鎖定數(shù)據(jù)

5、庫來的初步數(shù)據(jù),Di Bisceglie et al. 2006,24周HBV DNA, copies/mL,2 年時PCR陰性（%）,高精準HBV DNA檢測能更準確預測遠期療效,高靈敏度HBV DNA檢測比普通試劑能更準確判定病毒學突破,,,,HBV DNA (log10 IU/mL),,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,6.0,病毒學突破,Antiviral drug,Months,6,0,12,,,,18,,

6、16,,,普通試劑,COBAS Taqman,檢測靈敏度,,,,,,,,南方醫(yī)院用67例治療前為HBV DNA強陽性樣本，治療24周后采用cobas TaqMan HBV檢測與普通檢測試劑結果對比,67例患者: HBeAg(+)，ALT≥2ULN，HBV DNA＞ 6.0 log10 IU/mL--治療前用cobas檢測結果為7.90±0.73 log10 IU/mL--治療前用普通試劑檢測結果為7.11±0

7、.44 log10 IU/mL,普通PCR法 “假陰性”率高達44% (26/59),cobas高靈敏度HBV DNA檢測能更準確判斷治療終點，有效防漏檢（實例1）,,COBAS HBV,430例血漿Realtime PCRHBV<1000 copies/mL,222例（51.6%）>20 IU/mL,208/430(48.4%)<20 IU/mL,,,,,,,,64/222（28.38%）E+02 copie

8、s/mL,,,2.0 test,107/222（48.20%）E+03 copies/mL,35/222（15.77%）E+04copies/mL,7/222（3.15%）E+05 copies/mL,2/222（0.9%）E+07copies/mL,7/222（3.15%）E+06copies/mL,,,經cobas TaqMan HBV 檢測后，共有158/430（36.7%）病毒載量> 1000 copies/mL,C

9、obas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV病毒載量系統(tǒng)對慢性乙型肝炎抗病毒治療監(jiān)測的意義李敏偉 沃健兒 倪淑君 王 靜 李蘭娟浙江大學附屬第一醫(yī)院傳染病診治國家重點實驗室Data on file,cobas高靈敏度HBV DNA檢測能更準確判斷治療終點，有效防漏檢（實例 2）,高靈敏度HBV DNA檢測的意義,更準確判斷治療起點更準確判斷應答情況更準確預測遠期療效更早發(fā)現(xiàn)病毒學突破更準確預測耐藥發(fā)生

10、更準確判斷治療終點,,正確的臨床決策,全球有2億人感染HCV流行率2.2–3.0%1–31.7億慢性攜帶者2HCV相關的肝臟疾病每年奪取超過25萬人的生命 1~80% 的感染者沒有任何的臨床癥狀5,640–85% 的感染著未得到診斷7–12,HCV臨床背景,1Chevaliez. Clin Microbiol Infect 2011; 2WHO 2003; 3Lavanchy. Liver Int 2009; 4Wiessi

11、ng et al. Eurosurveillance 2008; 5Hoofnagle. Hepatology 2002; 6Lemon et al. Field’s Virology 2007; 7http://www.thewellingtonliverunit.com/treatments-hepatitis-c.asp; 8Schlosser et al. EASL 2009; 9Vermehren et al. DGVS

12、2010; 10Gane. New Zealand Doctor 2007; 11Wild. Gastroenterology and Endoscopy News 2010; 12http://www.hepatitiscmsg.org/hep-c-facts--stats.html.,國際指南明確提出高檢測靈敏度要求,HCV RNA檢測應使用高靈敏度的試劑（最低檢出限＜15 IU/mL）,APASL指南,“治療HCV感染的期望臨床

13、終點是清除病毒，即采用最敏感的方法也無法檢測到血清HCV病毒RNA，因此實驗室內部檢測應采用real-time PCR的方法對病毒進行檢測”,,,,持續(xù)病毒學應答(SVR),,無應答,基線,治療,復發(fā),,部分應答,UndetectableHCV RNA,HCV RNA,,,,反彈,HCV RNA 檢測限,,,療效判定時間點,高靈敏度HCV RNA檢測能更有效執(zhí)行RGT策略,RVR (Rapid Virus Response ,快速病

14、毒學應答), EVR (Early Virus Response ,早期病毒學應答)DVR (Delayed Virus Response, 延遲病毒學應答), NR (Null Response無應答), PR (Partial Response,部分應答),cobas高靈敏度HCV RNA檢測更準確判斷應答模式,中國基因1型患者RGT治療方案基于中國現(xiàn)有平臺檢測（不全是高靈敏度HCV RNA檢測）,,HCV RNA 陰性,

15、HCV RNA 陽性,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽性 (>2 log10),Peg-IFN/RBV治療48周,Peg-IFN/RBV治療48周,停止治療,,基線,Wk 4,Wk 12,Wk 24,HCV RNA 陽性,Peg-IFN/RBV治療72周,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽性 (<2 log10),HCV 基因1型,,HCV 基因 2/3型,HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽性,

16、HCV RNA 陰性,HCV RNA 陽性 (>2 log10) 此后陰性,停止治療,,基線,Wk 4,Wk 12,Peg-IFN/RBV for 48 weeks,HCV RNA 陽性 (<2 log10)或者24周陽性,Peg-IFN/RBVfor 24 weeks,Wk 24,中國基因2/3型患者RGT治療方案基于中國現(xiàn)有平臺檢測（不全是高靈敏度HCV RNA檢測）,治療時間（周）,普通試劑的HCV RNA

17、檢測易引起pEVR誤判為cEVRcobas高靈敏度 HCV RNA檢測可有效防止因不當縮短療程引起的復發(fā),,,0周,12周,24周,48周 (EOT),,HCV RNA (IU/mL),,,,,,,誤判為cEVR,,HCV RNA下降值>2 log10 (IU/mL),,,,72周 (SVR),,,,終止治療,,復發(fā),由于pEVR被誤判為cEVR，未延長療程，導致出現(xiàn)所謂的“復發(fā)”,,Cobas Taqman檢測下限 (

18、<15 IU/mL),普通試劑檢測下限 (<1000 IU/mL),,cobas,普通檢測,魏來、陳新月等 ，傳染病信息 2012年第25卷第3期,223例HCV患者,非RVR 33.63%(75/223),RVR 66.37%(148/223),,,,4周,,,,,陽性 62.67%（47/75）,假陰性 37.33%（28/75）,,,,,cobas,cEVR 89.24%(199/223),,,,非cE

19、VR 89.24%(24/223),普通檢測,,,,,陽性 79.17%（19/24）,假陰性 20.83%（5/24）,高靈敏度HCV RNA檢測指導正確的臨床決策靈敏度較差的檢測可能導致不正確的治療決策,普通檢測試劑可能導致不當?shù)目s短療程，增加復發(fā)可能,12周,cobas高靈敏度HCV RNA檢測的意義,更有效執(zhí)行RGT策略更準確判斷應答模式有效防止pEVR與cEVR的誤判，正確指導用藥,,正確的臨床決策,羅氏coba

20、s TaqMan病毒載量檢測系統(tǒng),+,全自動病毒載量平臺, sample-in, result-out 專利的內部標準品定量，保障結果的準確度和精密度流程靈活方便：試劑即拿即用，實驗中隨時添加樣本、試劑及耗材實驗條碼自動掃描設計,方便實驗記錄及追蹤有效避免污染,羅氏cobas TaqMan病毒載量卓越的檢測性能,,1.2 x 108 IU/mL HBV,,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,,陰性質控品,低濃度陽性質控

21、品,高濃度陽性質控品,正常人血漿,,,,,,SK24Rack 1,,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,,SK24Rack 2,,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,,SK24Rack 3,,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,,SK24Rack 4,每批4架重復檢測5批,,樣本棋盤放置研究顯示零交叉污染,*Roche Internal Studies – Data on File,,羅氏coba

22、s TaqMan 病毒載量有效防交叉污染,WHO 標準品,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通試劑 1普通試劑 2,,,,病毒學應答,治療起始濃度,

23、,,Expected level (IU/mL),多中心評估: WHO標準品溯源性對比,,正確的臨床決策需要可靠的實驗室結果,只有cobas TaqMan 全部結果符合溯源性要求,,,Genotype C,Genotype B,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver An

24、nual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通試劑1普通試劑2,,,,Virologicresponse NAs,Decision to treat,,Virologicresponse NAs,Decision to treat,,,,Expected level (IU/mL),Expected level (IU/mL),只有cobas TaqMan HB