基于組織芯片篩選多種相關蛋白建立卵巢漿液性癌的分子分型.pdf

1、研究背景：
　　組織病理學診斷是腫瘤診斷的金標準和臨床治療的基礎，但對病理分級與手術病理分期相同的卵巢漿液性癌患者采取同樣的治療方案，他們的治療反應以及預后卻有著明顯的不同，究其原因是卵巢漿液性癌在分子水平上存在高度個體異質(zhì)性?；诜肿赢愘|(zhì)性的個體化診療是婦科腫瘤治療的新方向，而分子分型是實現(xiàn)個體化診療的基礎。本研究目的是通過多蛋白篩選初步構(gòu)建卵巢漿液性癌預后以及鉑類敏感性分子分型。
　　研究方法：
　　1.構(gòu)建臨床病

2、理數(shù)據(jù)庫以及制作組織微陣列
　　納入2000年初至2009年底10年間在北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科完成初次腫瘤細胞減滅術和鉑類術后化療并留有初次手術病理標本的晚期卵巢漿液性癌患者，共計122例，嚴密隨訪截止至2012年12月31日。由兩位病理科醫(yī)師確認原發(fā)癌灶（癌灶直徑≥3mm）并標記，鏡下觀察癌組織無明顯鈣化及壞死，制作卵巢漿液性癌癌灶組織微陣列（組織芯片）蠟塊并切片，選取高質(zhì)量組織芯片備后續(xù)試驗使用。
　　2.免疫組織化學染色以

3、及顯微圖像采集分析
　　選取21個蛋白進行免疫組織化學染色，嚴格固定同一批次組織芯片免疫組織化學染色以及顯微圖像采集的各項物理、化學、時間、硬件及軟件參數(shù)，確保同一批次芯片每一個芯片點接受同樣的試驗操作。對采集的圖像進行灰度分析，獲取平均光密度值，修正后，根據(jù)平均光密度值大小轉(zhuǎn)化為表達強度分級（無/微量表達、低表達、中表達和高表達）。
　　3.分子分型統(tǒng)計模型構(gòu)建以及臨床應用轉(zhuǎn)化
　　以3年為界，將0S＜3年定義為預后

4、差，0S≥3年定義為預后好;以1年為界，將DFS/PFS＜1年定義為鉑類不敏感，DFS/PFS≥1年定義為鉑類敏感。采用Pearson卡方和Spearmann等級相關對蛋白表達強度和預后指標及鉑類敏感性指標進行交叉分析，P值＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義，將P值＜0.05的蛋白納入下一步建模擬合范圍。對進入建模擬合范圍的蛋白，采用Logistic回歸建模，SCORE檢驗選入，似然比檢驗篩除，逐步回歸，得到預測預后以及化療敏感性準確率最

5、高的分子分型。
　　研究結(jié)果：
　　1.初步建立卵巢漿液性癌預后分子分型
　　聯(lián)合檢測Pim-1、HER-2和WT-1對預測預后總準確率最高，較單測Pim-1總的預測準確效率由77.9％提高至82.8％，其中對預后差的預測準確率由62.3％提高為69.8％，對預后好的預測準確率由89.9％提高為92.8％。移去模型中任一蛋白，對于預測效果均會帶來顯著改變。
　　2.初步建立卵巢漿液性癌鉑類化療敏感性分子分型

6、>　　聯(lián)合檢測HER-2、P-gp和Survivin對預測鉑類敏感性總準確率最高，較單測HER-2總的預測準確率由66.7％提高至70.4％，其中對預后差的預測準確率由39.6％提高為62.5％，但對預后好的預測準確率由88.3％降至為72.7％。移去模型中任一蛋白，對于預測效果均會帶來顯著改變。
　　3.把分子分型統(tǒng)計模型轉(zhuǎn)化為臨床應用
　　把Pim-1、HER-2、WT-1、P-gp和Survivin的弱表達定義為0分，

7、強表達定義為1分，3者相加即為預后分子分型（Pim-1、HER-2和WT-1）或鉑類敏感性分子分型（HER-2、P-gp和Survivin）的分值，分子分型得分為0分至3分，0分與1分提示預后好或者鉑類敏感，2分或者3分提示預后差或者鉑類不敏感，
　　結(jié)論：
　　1.聯(lián)合檢測Pim-1、HER-2和WT-1可以更準確地預測患者的預后;
　　2.聯(lián)合檢測HER-2、P-gp和Survivin可以更準確地預測患者的鉑類化療