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1、目的:糖代謝是生物體內(nèi)普遍存在的能量代謝過程。在血管損傷和惡性腫瘤組織中的糖代謝活躍,以滿足細(xì)胞增殖的需要。目前,有關(guān)糖代謝異常與增殖性疾病的關(guān)系仍尚未完全清晰。本文通過觀察小鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)皮損傷模型、惡性腫瘤及腫瘤細(xì)胞系中糖代謝途徑關(guān)鍵酶的活性變化,探討糖代謝與細(xì)胞增殖的關(guān)系,為理解增殖細(xì)胞的糖代謝規(guī)律提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:⑴隨機(jī)選取C57BL/6小鼠,雄性,8~12周,13只。異氟烷吸入式麻醉,行單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎,設(shè)為血管損
2、傷組;對(duì)側(cè)頸總動(dòng)脈不作處理設(shè)為假手術(shù)組。血管損傷組和假手術(shù)組分別于結(jié)扎術(shù)后14天,心臟灌流后取小鼠頸總動(dòng)脈并將血管分為兩部分,一部分勻漿,提取組織蛋白,分別用Western blot方法和己糖激酶活性測(cè)定試劑盒檢測(cè)血管壁中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)的表達(dá)和己糖激酶(hexokinase,HK)活性;另一部分取材后,進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片、免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)
3、糖酵解途徑中最后一個(gè)關(guān)鍵酶丙酮酸激酶-2(pyruvate kinase-2,PKM2)的表達(dá)。⑵收集2014年7月-2015年11月期間河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科結(jié)直腸癌的標(biāo)本30例,以結(jié)直腸癌組織標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組,距腫瘤10 cm以外的正常腸粘膜組織為對(duì)照組。標(biāo)本分為兩份,一份放入-80℃冰箱中凍存,隨后用Western blot方法檢測(cè)標(biāo)本中G6PD、PKM2的表達(dá),用己糖激酶活性測(cè)定試劑盒檢測(cè)HK活性;另一份放入4%的多聚甲醛組織固
4、定液中固定,隨后進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片及免疫組化染色檢測(cè)G6PD及PKM2的表達(dá)。⑶無(wú)菌環(huán)境下培養(yǎng)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞系HCT116細(xì)胞和人正常結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞系FHC細(xì)胞,用Western blot方法檢測(cè)兩種細(xì)胞中G6PD和PKM2的表達(dá),用己糖激酶活性測(cè)定試劑盒檢測(cè)HK活性。
結(jié)果:①C57BL/6小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎損傷后第14天,Western blot結(jié)果顯示,損傷側(cè)G6PD的表達(dá)明顯高于對(duì)照側(cè)(P<0.05);并且HK
5、活性變化趨勢(shì)與G6PD相似,損傷側(cè)HK的活性明顯高于對(duì)照(P<0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,損傷側(cè)PKM2的陽(yáng)性顆粒數(shù)明顯升高(P<0.05)。②Western blot結(jié)果顯示,30例患者腫瘤組織中G6PD和PKM2的表達(dá)水平高于癌旁正常組織(P<0.05)。腫瘤組織中HK活性水平高于癌旁正常組織(P<0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,腫瘤組織中G6PD和PKM2的陽(yáng)性顆粒數(shù)高于癌旁正常組織(P<0.05)。③Western bl
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