自分泌乙酰膽堿對(duì)大鼠胸腺組織細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 乙酰膽堿作為傳統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)被人們所熟知，近年來研究發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物免疫細(xì)胞可表達(dá)包括蕈堿受體（M受體，MAChR）、煙堿樣受體(N受體，NAChR)、合成ACh所需的乙酰轉(zhuǎn)移酶以及分解ACh的乙酰膽堿酯酶[1]，同時(shí)Fujii等也發(fā)現(xiàn)被PHA刺激過的大鼠胸腺細(xì)胞分泌ACh明顯有所提高[2]。其證明了在免疫系統(tǒng)中存在合成分解ACh，并通過自分泌或旁分泌釋放ACh作用于自身或周圍細(xì)胞從而調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能的非神經(jīng)源性膽

2、堿能系統(tǒng)。但國(guó)內(nèi)外對(duì)其在免疫機(jī)制中的作用認(rèn)識(shí)不一，且多針對(duì)外周淋巴細(xì)胞進(jìn)行研究，本實(shí)驗(yàn)旨在通過檢測(cè)體外培養(yǎng)大鼠胸腺組織細(xì)胞的活力并分析其T細(xì)胞分化不同亞群所占比例，初步探討非神經(jīng)源性乙酰膽堿對(duì)中樞免疫系統(tǒng)的作用和作用途徑。
　　 方法:
　　 使用植物血凝素(PHA)刺激體外培養(yǎng)大鼠胸腺組織細(xì)胞，根據(jù)加入試劑分為A組（空白對(duì)照）、B組（阿托品）、C組（維庫溴銨）及D組（阿托品+維庫溴銨），培養(yǎng)后CellCountingK

3、it-8(CCK-8)法測(cè)細(xì)胞活性，流式細(xì)胞術(shù)分析T細(xì)胞亞群。采用單方差分析，SNK-q法兩兩比較分析各組之間差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.CCK-8法細(xì)胞活力分析:各組大鼠胸腺組織細(xì)胞在450nm處與空白組校對(duì)后OD值（見表1），統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)通過單向方差分析得:F=24.945，P=0.000＜0.01，SNK-q法兩兩比較，A、D組之間細(xì)胞活力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，C組細(xì)胞活性明顯高于A、B、D組(P＜0.

4、05)，B組細(xì)胞活力低于A、C、D組(P＜0.05)。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)分析:檢測(cè)A、B、C、D組大鼠胸腺組織細(xì)胞中CD3+CD4+細(xì)胞及CD3+CD8+細(xì)胞比例（見表1、圖A-H）。CD3+CD4+細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)通過單向方差分析得:F=1.469，P=0.239＞0.05，不能認(rèn)為各處理組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CD3+CD8+細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)通過方差分析得:F=0.848，P=0.477＞0.05，不能認(rèn)為各處理組之間差

5、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD3+CD4+細(xì)胞與CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)量之比統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)通過單因素方差分析得:F=1.475，P=0.238＞0.05，不能認(rèn)為各處理組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.ACh能通過N受體降低大鼠胸腺組織細(xì)胞活力，對(duì)其增殖起抑制作用。
　　 2.ACh能通過M受體降低大鼠胸腺組織細(xì)胞活力，對(duì)其增殖起增強(qiáng)作用。
　　 3.在大鼠胸腺細(xì)胞被PHA激活的條件下，M、N受體均接受A