人結(jié)直腸癌組織細胞衰老減慢、糖代謝增強.pdf

1、目的：本文通過檢測人結(jié)直腸癌組織及腫瘤細胞中 p16、p21、衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）衰老標志物以及糖代謝途徑關(guān)鍵酶的表達變化，試圖探討結(jié)直腸癌衰老活性及其與糖代謝重編程的關(guān)系。
　　方法：
　　1.人結(jié)直腸癌標本：收集河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院外二科人結(jié)直腸癌患者63例，取其手術(shù)切除標本，以距腫瘤10 cm以外的正常腸粘膜組織為對照組。石蠟切片用于免疫組織化學染色檢測p16和p21的表達。冰凍切片用于檢測細胞S

2、A-β-Gal活性。
　　2.人結(jié)腸癌細胞株：TNF-α處理的人正常結(jié)直腸粘膜細胞系FHC細胞及三種人結(jié)腸癌細胞系 HCT116、HT29、CACO2細胞，進行 MTT分析，以及SA-β-Gal染色。
　　3.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）和丙酮酸激酶-2（PKM2）表達分析：
　　提取結(jié)直腸癌新鮮組織或細胞總蛋白，用Western blot方法檢測G6PD和PKM2的表達；提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進行實時熒光定量聚

3、合酶鏈式反應，檢測G6PD、PKM2 mRNA水平。
　　4.己糖激酶（HK）活性測定：按試劑盒說明書操作。
　　結(jié)果：
　　1.人結(jié)直腸癌腫瘤組織中p16和p21表達下調(diào)，SA-β-Gal活性降低
　　免疫組織化學染色結(jié)果顯示，人結(jié)直腸癌腫瘤組織中衰老相關(guān)蛋白p16、p21表達低于癌旁正常組織（P＜0.05）；并且腫瘤組織衰老相關(guān)標志物SA-β-Gal染色強度低于癌旁正常組織（P＜0.05）。
　　2.T

4、NF-α誘導人結(jié)腸癌細胞SA-β-Gal活性降低，活力增強
　　使用TNF-α對人結(jié)直腸癌細胞株HCT116、HT-29、Caco-2和正常結(jié)直腸粘膜細胞株FHC刺激72h，而后進行SA-β-Gal染色及MTT分析。結(jié)果顯示，相同刺激條件下，HCT116、HT-29和 Caco-2三種腫瘤細胞SA-β-Gal活性低于FHC細胞（P＜0.05）；MTT分析顯示，TNF-α誘導三種腫瘤細胞活力較FHC細胞升高（P＜0.05）。

5、　　3.人結(jié)直腸癌腫瘤組織中G6PD、PKM2表達升高
　　qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，人結(jié)直腸癌腫瘤組織中G6PD、PKM2 mRNA和蛋白表達均高于癌旁正常組織（P＜0.05）。
　　4.人結(jié)直腸癌細胞中G6PD、PKM2和HK表達及活性升高
　　Western blot結(jié)果顯示， HCT116、HT-29和Caco-2三種人結(jié)腸癌腫瘤細胞中 G6PD、PKM2蛋白表達高于FHC正常結(jié)直腸粘膜

6、細胞（P＜0.05）；細胞免疫熒光結(jié)果顯示，人結(jié)腸癌腫瘤細胞中PKM2蛋白表達量高于正常結(jié)直腸粘膜細胞（P＜0.05）；并且三種腫瘤細胞中己糖激酶（HK）活性明顯高于正常結(jié)直腸粘膜細胞（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.人結(jié)直腸癌組織細胞中p16、p21蛋白表達下調(diào)，SA-β-Gal活性降低，細胞活力升高；
　　2.人結(jié)直腸癌組織細胞中，糖酵解途徑關(guān)鍵酶G6PD、PKM2和HK的表達及活性升高；
　　3.人結(jié)