間充質(zhì)干細胞向食道組織細胞的誘導(dǎo)分化及其在食道組織再生中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　探討間充質(zhì)干細胞（MSC）向食道平滑肌細胞、上皮細胞誘導(dǎo)分化的有效方法和機制，為食道組織工程提供種子細胞；探索電紡絲纖維、脫細胞食道粘膜與生物可降解聚氨酯（PU）復(fù)合支架的構(gòu)建以及動物體內(nèi)重建修復(fù)食道缺損的可行性方法。
　　方法：
　　以密度梯度法提取和培養(yǎng)MSC，流式細胞術(shù)檢測CD29、CD34、CD45、CD44、CD90的表達情況。分別采用與成熟平滑肌細胞共培養(yǎng)，EGF等誘導(dǎo)劑直接誘導(dǎo)的方法，誘導(dǎo)MS

2、C向平滑肌細胞和上皮細胞分化，通過形態(tài)觀察、免疫熒光染色等方法檢測上述誘導(dǎo)方法的有效性。另一方面，以靜電紡絲法制備PCL/SF（聚己內(nèi)酯/絲素）多孔納米纖維（模擬食道基膜niche），表面活性劑聯(lián)合DNA酶法制備脫細胞食道粘膜基質(zhì)，以生物可降解PU為基材制備具有微槽圖案的支架（支持肌組織生長），以正常食道的組織學(xué)構(gòu)造為導(dǎo)向，復(fù)合上述多層支架構(gòu)造，制備了可同時支持食道組織中粘膜、粘膜下層和肌層細胞和組織再生的復(fù)合支架。以MSC為種子細胞，

3、新西蘭大白兔為實驗動物，首先行背部皮下埋植以檢測支架的組織相容性及支架在體內(nèi)的作用，包括炎癥、周圍組織供血、支架降解等；其次，建立小型動物缺損模型，以片狀支架植入頸段食道，以檢測支架與體內(nèi)食道的作用以及修復(fù)小范圍食道缺損的可行性；最后，在上述實驗成功的基礎(chǔ)上，構(gòu)建管狀食道支架，建立原位替代整環(huán)食道使其再生的技術(shù)，包括粘膜和肌層的再生。
　　結(jié)果：
　　培養(yǎng)的MSC細胞梭形，呈旋渦狀排列，強表達間充質(zhì)干細胞的特征蛋白CD29、

4、CD44、CD90；不表達CD34、CD45。誘導(dǎo)分化的MSC分別表達平滑肌細胞、上皮細胞的特異蛋
　　白α-actin和CK14。動物皮下實驗結(jié)果顯示支架具有良好的生物學(xué)性能；原位替代實驗中，所有兔子未出現(xiàn)吻合口瘺，染色結(jié)果顯示手術(shù)部位實現(xiàn)上皮化，并可見平滑肌再生。
　　結(jié)論：
　　MSC采用上述方法可以完成平滑肌細胞、上皮細胞的誘導(dǎo)分化。由電紡絲纖維、脫細胞食道粘膜與有槽化聚氨酯（PU）復(fù)合構(gòu)建的支架，能支持MSC