一種新型Rab蛋白Rab40的細(xì)胞定位研究.pdf

1、Ras超家族是最廣為人知的一大類小分子GTP酶。根據(jù)其結(jié)構(gòu)、序列和功能的不同,人們把Ras超家族分為5個主要家族:Ras、Rho、Rab、Ran和Arf。Rab/Ypt/Sec4蛋白家族是Ras超家族中成員最多的一個分支,表達于各種真核生物中,至今已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過70種Rab以及Rab-like蛋白。
　　 Rab40是RabGTP酶家族的成員,目前關(guān)于人類Rab40的報道很少,對于其生物學(xué)功能還不清楚。人類Rab40分為Rab4

2、0A/B/C三個亞型,并且三者之間有很高的同源性。首先通過PCR的方法,用多組織cDNA文庫檢測了hRab40的三個亞型在組織中的表達;通過免疫熒光等實驗,對人類Rab40A/B/C的亞細(xì)胞定位及其影響Rab40C定位的氨基酸序列進行了研究。研究的結(jié)果如下:
　　 通過PCR的方法,對人類不同組織(腦、心、肺、肝、胰、腎、胎盤、骨骼肌)的cDNA文庫進行檢測,發(fā)現(xiàn)Rab40A/B/C在眾多組織中都有表達,但總體上看Rab40B/

3、C的表達水平較Rab40A高,而且Rab40A在胎盤和骨骼肌中表達水平較高;Rab40B在腦、心臟、肝臟、骨骼肌中高表達;Rab40C在胰腺、腎中高表達。Rab40A/B/C的廣譜表達,說明它們可能調(diào)控某些基本的生理功能。
　　 免疫熒光實驗表明,Rab40A主要分布于胞質(zhì)內(nèi),細(xì)胞核內(nèi)也有少量表達,Rab40B主要分布于細(xì)胞核內(nèi),推測它可能與核內(nèi)的基本生理活動有關(guān);Rab40C有很明顯的囊泡結(jié)構(gòu),研究證明Rab40C定位于脂滴,

4、并與TIP47(47kD的尾連蛋白)、Rab18有部分共定位,這進一步證明Rab40C定位于脂滴。還發(fā)現(xiàn)Rab40C與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中間室標(biāo)志物-53(ERGIC-53)有部分共定位。因為細(xì)胞內(nèi)脂滴的合成部位尚未證實,所以目前廣泛接受的是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成模型,hRab40C與ERGIC-53的部分共定位說明hRab-40C在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴之間發(fā)揮作用,推測可能在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出芽形成脂滴這個過程中發(fā)揮某種作用。通過對hRab40C突變體的研究確定了S