糖尿病對小鼠牙齒伸長運動的影響.pdf

1、目的：
　　建立糖尿病小鼠伸長運動實驗模型，研究糖尿病小鼠牙齒垂直向伸長過程中Ⅰ型膠原蛋白和富含酸性半胱氨酸的分泌蛋白（SPARC）的表達，探究小鼠牙齒伸長運動的機制以及糖尿病對其的影響，為臨床上修復牙列缺損提供理論基礎。
　　方法：
　　60只雄性8周齡C57BL/6J小鼠，體重在19-25g左右。小鼠隨機分為兩組，即對照組（正常組）與實驗組（糖尿病組），每組30只；每組再隨機分為5個亞組即0天、3天、6天、9天、1

2、2天組，每組各6只。實驗組小鼠連續(xù)5天給予腹腔分次注射70mg/kg1％的鏈脲佐菌素（STZ），對照組注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。注射后72小時后剪尾取血測量血糖，每周測量一次空腹血糖和體重，連續(xù)4周，空腹血糖值≥11.1mmol/L為建模成功，建模成功后進行實驗。各組小鼠在3%水合氯醛全麻下行右側(cè)上頜后牙拔除術(shù)，壓迫止血拔牙部位。將兩組小鼠分別在0天、3天、6天、9天、12天處死，提取下頜骨。標本在4%多聚甲醛溶液中固定24-48小時

3、，10%EDTA脫鈣液脫鈣40-50天，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片，HE染色，觀察拔牙后下頜牙齒伸長運動過程中牙周圍組織細胞的變化；免疫組化染色，觀察實驗組與對照組在SPARC與Ⅰ型膠原蛋白的表達差異，運用免疫組化圖像進行結(jié)果分析，測量表達面積與表達強度，計算平均灰度值與平均光密度（OD），用SPSS19.0統(tǒng)計學方法進行數(shù)據(jù)處理。
　　結(jié)果：
　　形態(tài)學：鏡下與X線片顯示12天后兩組小鼠下頜磨牙向伸長，實驗組伸長量小于對照

4、組（P<0.05）；體重變化:實驗組與對照組體重3-6天下降（P<0.05），實驗組體重下降程度大于對照組；9天兩組體重逐漸回升（P<0.05），12天時接近初始體重，實驗組速度慢于對照組。HE染色：1.牙周膜寬度：實驗組與對照組左右兩側(cè)第一磨牙根中1/3牙周膜寬度平均值無明顯變化（P>0.05）；2.破骨細胞計數(shù)：實驗組骨基質(zhì)染色不均，骨線不整齊，骨質(zhì)疏松，0天至12天細胞隨時間呈增長趨勢（P<0.05）；對照組0天時未見明顯破骨細胞

5、，3-12天破骨細胞逐漸增多，12天時最多（P<0.05），僅12天時實驗組小于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其他各時間組均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　SPARC與Ⅰ型膠原蛋白免疫組化：隨著時間增加，平均灰度值逐漸降低，陽性表達逐漸增強，SPARC的平均灰度值與Ⅰ型膠原蛋白在不同時間點上，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。SPARC在0天、3天、6天、9天、12天時，實驗組顯著低于對照組，實驗組表達強于對照組（

6、P<0.05）；Ⅰ膠原蛋白除第6天外，其他各組實驗組顯著高于對照組，實驗組表達低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。SPARC和Ⅰ型膠原蛋白的OD值隨著時間的增加不斷增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗組Ⅰ型膠原蛋白OD值低于對照組，SPARC的 OD值顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.對照組與實驗組小鼠拔除上頜牙后，對頜牙均有伸長現(xiàn)象，且糖尿病小鼠骨質(zhì)疏松傾向伸長量小于