電針對慢性痛大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒成分相關(guān)受體CRF1R等表達影響.pdf

1、研究背景
　　針刺是祖國醫(yī)學(xué)幾千年發(fā)展中重要的一部分，針灸治療疼痛類疾病有著獨有的優(yōu)勢。一項調(diào)查表明:針灸優(yōu)勢病種有腰痛病、頭痛病、項痹病、肩凝癥、痛經(jīng)、胃脘痛等等[1]。在疼痛治療上，針灸療效明顯。臨床上發(fā)現(xiàn)疼痛常伴隨焦慮、抑郁等情緒表現(xiàn)，兩者相互影響，往往易加重病情。針刺對改善抑郁、焦慮等疾病也有較好效果。但針刺對緩解疼痛伴隨的厭惡情緒是否有效，還不清楚。
　　近年來，采用功能性磁共振成像等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)在大腦中樞系統(tǒng)存在一

2、些參與疼痛不同層面（包括辨識、情緒和情感）加工處理的腦內(nèi)結(jié)構(gòu)，包括大腦皮層初級及次級軀體感覺區(qū)、島葉、前扣帶回、前額葉皮質(zhì)及丘腦結(jié)構(gòu);以及杏仁核、基底神經(jīng)節(jié)、小腦、海馬、頂葉和顳葉內(nèi)的一些相關(guān)的皮質(zhì)區(qū)等，這些區(qū)域結(jié)構(gòu)被稱為“疼痛神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)pain neuromatrix（或神經(jīng)矩陣）”[2]。這些腦區(qū)共同參與疼痛信息在腦內(nèi)的加工活動。杏仁核是該網(wǎng)絡(luò)中調(diào)節(jié)情緒和應(yīng)激的重要中樞核團。研究表明:其參與疼痛的情緒加工，促進慢性疼痛的產(chǎn)生和維持。其

3、內(nèi)部結(jié)構(gòu)中有多種生物活性分子參與疼痛的調(diào)節(jié)。其中，促皮質(zhì)釋放因子(CRF)是中樞系統(tǒng)內(nèi)重要的應(yīng)激激素，調(diào)節(jié)人體內(nèi)臟活動和情緒反應(yīng)。谷氨酸(Glu)是主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，與NMDA等受體結(jié)合產(chǎn)生生物活性，參與疼痛的產(chǎn)生和發(fā)展。γ氨基丁酸(GABA)是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，其受體是臨床多種鎮(zhèn)痛藥物的治療靶點，這些物質(zhì)共同參與了大腦中樞疼痛信息的調(diào)控。有學(xué)者研究針刺對人體大腦的影響，通過fMRI技術(shù)發(fā)現(xiàn)在疼痛狀態(tài)下，大腦多個腦區(qū)處于激活狀態(tài)，

4、而針刺過程中，呈現(xiàn)負激活狀態(tài)。如海馬、杏仁核等邊緣系統(tǒng)區(qū)域。
　　我們前期的研究表明海馬和下丘腦膽堿能系統(tǒng)參與針刺的鎮(zhèn)痛過程，而杏仁核與海馬同屬于大腦邊緣系統(tǒng)，參與人體情緒、記憶等生理活動。因此，本實驗在慢性痛負性情緒模型大鼠尚，觀察電針治療后，杏仁核內(nèi)情緒相關(guān)的CRF受體、興奮性氨基酸Glu受體N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、抑制性氨基酸GABA受體發(fā)生的變化，來探討針刺緩解慢性神經(jīng)痛大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒成分變化的機制，

5、為臨床針刺治療疼痛疾病提供理論依據(jù)。
　　材料與方法
　　第一部分實驗:36只Wistar大鼠分2批進行，分別隨機分各3組:正常對照組(NOM)、CCI模型組(CCI)、電針組(EA+CC)、負性情緒模型組(NA)、電針加負性情緒組(EA+NA)。行坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)造成慢性神經(jīng)痛模型，手持接通電針儀的針灸針反復(fù)刺激CCI大鼠足底造成動物厭惡反應(yīng)模型。電針雙側(cè)“足三里”-“陽陵泉”穴，每日1次，共7天。痛覺測定儀檢測大鼠足底熱痛

6、閾，計算雙足縮腿反應(yīng)潛伏期差值(PWLD);用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測杏仁核組織促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體亞型CRF-1R、CRF-2R，谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體亞型NR2A、NR2B及γ-氨基丁酸受體亞型GABAa、GABAc基因的相對表達量。
　　第二部分實驗:本次實驗使用32只Wistar大鼠，隨機分為4組:正常對照組，CCI+NA(負性情緒negative affection)模型組， CCI+N

7、A+電針(EA)組;CCI+NA+麻醉電針(AEA)組，每組8只。行坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后，對動物連續(xù)進行3天足底電刺激造成條件性位置偏惡(conditioned place aversion，CPA，負性情緒)模型。電針和麻醉狀態(tài)下電針雙側(cè)“足三里”-“陽陵泉”穴(1mA，2/15Hz)，每日1次，共7天。痛覺測定儀檢測大鼠足底熱痛閾，計算雙足縮腿反應(yīng)潛伏期差值(PWLD);條件位置厭惡設(shè)備記錄大鼠在條件控制箱停留時間(CPAs);用蛋白質(zhì)

8、印跡法(WB)檢測杏仁核組織內(nèi)CRF1R，CRF2R，NMDA-NR2B，mGluR7，以及GABAA-α2，GABABR2受體蛋白表達量。
　　數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
　　所有數(shù)據(jù)為計量資料，以均數(shù)±標準差(M±SD)表示，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，實驗數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，組間兩兩比較選用LSD檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1)電針(EA)對慢性痛負性情緒大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和

9、情緒相關(guān)CRF受體等基因表達的影響
　　與正常組相比，CCI、負性情緒組PWLD均顯著增加(P＜0.05)，分別與兩模型組比，電針7天后，電針組與電針加負性情緒組PWLD顯著下降(P＜0.05)，顯示出明顯鎮(zhèn)痛效應(yīng)。
　　PCR的結(jié)果表明:與正常組比較，CCI模型組CRF-1R、CRF-2R、NR2A、NR2B受體基因表達量均顯著增加(P＜0.05)，GABAaR及GABAcR基因表達變化不明顯(P＞0.05)，而負性情緒組

10、6個指標基因表達量均顯著降低(P＜0.05)。分別與兩模型組比，電針組CRF-2R、NR2A、NR2B基因表達量顯著降低(P＜0.05)，負性情緒動物電針組除CRF-1R表達相對升高(P＞0.05)，其他基因表達量均顯著增加(P＜0.05)。
　　2)電針(EA)對慢性痛負性情緒大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒相關(guān)CRF受體等蛋白表達的影響
　　與正常組相比，條件位置厭惡(CPA)模型建立后，負性情緒模型組和兩電針組PWLD值均顯著

11、增加(P＜0.001);與模型組相比，電針組和麻醉電針組PWLD差值在電針5天和7天后均顯著下降(P＜0.001)。條件位置厭惡實驗結(jié)果表明:CPA模型建立后，與正常組比較，負性情緒組和兩電針組在條件控制箱停留時間明顯縮短P＜0.001）;與模型組相比，電針和麻醉電針組在電針7天后在條件控制箱內(nèi)停留時間延長，而電針組停留時間顯著增加P＜0.001），這表明電針和麻醉電針可以起到顯著的鎮(zhèn)痛作用，其中電針可以抑制疼痛厭惡情緒，麻醉電針無顯著

12、效應(yīng)。Western blot實驗結(jié)果表明:與正常組相比，模型組、兩電針組大鼠杏仁核內(nèi)CRF-1R、CRF-2R、NR2B、mGluR7、GABAA及GABAB蛋白表達水平均無顯著變化(P＞0.05)。
　　小結(jié)
　　1、重復(fù)電針足三里、陽陵泉可明顯減少神經(jīng)性疼痛和負性情緒在CCI和CCI負性情緒動物
　　2、電針可對慢性痛和負性情緒大鼠產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與其下調(diào)杏仁核內(nèi)CRF-1R、CRF-2R、NR2A、NR2B受