鈣庫操縱性Ca2+內流相關調節(jié)因子(SARAF)在心肌肥厚中的作用研究.pdf

1、背景與目的：心肌肥厚是許多心血管疾?。ǜ哐獕?、心力衰竭、心律失常等）的共同病理過程，研究證實,隨著心肌肥厚的發(fā)展,心力衰竭、心律失常、猝死等心血管事件的發(fā)生率顯著增加。因此,尋找心肌肥厚的治療靶點是當前心血管研究領域的重點和熱點。細胞內鈣離子信號轉導通路是誘導心肌肥厚的細胞主要信號通路之一，內鈣離子(Ca2+)增加是導致心肌細胞肥大的基本信號。研究表明基質交感分子1（stromal interacting molecule1,STIM1

2、）與Orai1(Calcium release-activated calcium channel protein1)相互作用，引起細胞外Ca2+內流。血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、去氧腎上腺素（phenylephrine,PE）誘導心肌細胞肥大的過程中，我們可以看到STIM1表達顯著上調和SOCE過度活化，而STIM1、Orai1敲減后，可改善AngⅡ、PE所誘導的SOCE活化和心肌細胞肥大；壓力超負荷所致肥厚心

3、肌中STIM1表達明顯增加，敲減心肌STIM1表達，可顯著地延緩心肌肥厚的進展；這表明STIM1、Orai1在心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。除STIM1、Orai1外，最近發(fā)現(xiàn)的一種新蛋白：鈣庫操控性Ca2+內流相關性調節(jié)因子（store-operated calcium entry associated regulatory factor,SARAF）可以促使STIM1與Orai1解離，防止細胞內Ca2+濃度過高。我們推測：長期壓

4、力超負荷時，心肌細胞中SARAF表達下調，導致細胞內Ca2+濃度持續(xù)升高，引起心肌細胞肥大和心肌肥厚；上調SARAF表達可以通過抑制心肌細胞內Ca2+超載，減輕心肌細胞肥大，從而延緩心肌肥厚的進展。為了證實這一假設我們擬構建C57 BL/6J小鼠心臟壓力超負荷致心肌肥厚模型，通過AngⅡ誘導心肌細胞肥大實驗，明確SARAF在心肌肥厚中的作用。
　　方法:研究分為動物實驗和細胞實驗兩部分。動物實驗部分：將8周齡雄性C57 BL/6J

5、小鼠40只（體重約28-30g），隨機分為4組：假手術對照組（Sham組）、心臟壓力超負荷組（CAA組）、空病毒轉染組（CAA+NC組）、SARAF基因過表達轉染組（CAA+SARAF組），CAA組、CAA+NC組、CAA+SARAF組分別行腹主動脈縮窄手術，CAA+NC組、CAA+SARAF組心肌分別行空病毒(Lenti-GFP)、人SARAF基因慢病毒(Lenti-hSARAF)過表達轉染。細胞實驗部分將C57 BL/6J小鼠心肌細

6、胞分為四組：對照組（control組）、血管緊張素Ⅱ誘導組（AngⅡ組）、空病毒轉染組（AngⅡ+NC組）、SARAF基因過表達轉染組（AngⅡ+SARAF組），分別用空病毒(Lenti-GFP)、人SARAF基因慢病毒(Lenti-hSARAF)過表達轉染AngⅡ+NC組、AngⅡ+SARAF組，孵育24h，繼之以AngⅡ(終濃度為200nmol/l)干預AngⅡ組、AngⅡ+NC組、AngⅡ+SARAF組72h。
　　1.小動

7、物超聲檢測小鼠心肌肥厚情況；
　　2.頸動脈插管測量各組小鼠血壓；
　　3.稱量小鼠體重及心臟體重，計算心臟/體重比值；
　　4.比較各組小鼠實體心臟大?。?br>　　5.HE染色觀察心肌組織中細胞的大??；
　　6.采用qPCR及 western-blotting檢測各組心肌組織及心肌細胞中Stim1、Orai1、SARAF表達情況；
　　7.α-actin免疫熒光染色心肌細胞，比較各組心肌細胞大小；結果：