新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后松果體中microRNA表達(dá)譜變化及miR-375對松果體功能的影響.pdf

1、目的：通過制作新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型，檢測腦損傷后大鼠松果體中microRNA的表達(dá)譜變化；并進(jìn)行松果體細(xì)胞培養(yǎng)，建立細(xì)胞缺氧缺糖模型，用miR-375慢病毒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測轉(zhuǎn)染效率及松果體功能的變化，探討miR-375在缺氧缺糖中對松果體功能的影響。
　　方法：采用7日齡SD新生大鼠，根據(jù)改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。將新生大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組）、缺氧缺血組（HIBD組），采用基因芯片及R

2、T-qPCR法檢測HIBD后24h大鼠松果體中microRNA表達(dá)譜的變化；采用新生24h以內(nèi)的SD大鼠進(jìn)行松果體培養(yǎng)，行氧糖剝奪(oxygen glucose deprivation，OGD)的處理方法，模擬缺氧缺血模型。選取氧糖剝奪后0h、12h、24h、48h、72h、96h六個時間點(diǎn)，RT-qPCR測定氧糖剝奪前后AANAT mRNA及miR-375表達(dá)的變化；ELISA法檢測褪黑素（MT）水平的變化；用CCK8法檢測細(xì)胞活性。

3、采用miR-375慢病毒載體轉(zhuǎn)染后，行上述實(shí)驗(yàn)，初步探討松果體中microRNA在缺氧缺血性腦損傷中的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1、芯片及RT-qPCR結(jié)果顯示，新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后松果體中microRNA表達(dá)譜發(fā)生變化。
　　2、RT-qPCR結(jié)果顯示，缺氧缺糖后miR-375表達(dá)上調(diào)，24h達(dá)到高峰后下降，72h趨向0h水平；AANAT表達(dá)下調(diào)，12h左右達(dá)最低點(diǎn)，72h趨向0h水平；miR-375慢病毒轉(zhuǎn)

4、染細(xì)胞后miR-375表達(dá)明顯上調(diào)，72h趨于穩(wěn)定；AANAT表達(dá)下調(diào)，48h趨于穩(wěn)定；miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后行缺氧缺糖實(shí)驗(yàn)，miR-375表達(dá)上調(diào)，24h達(dá)到高峰；AANAT表達(dá)下調(diào)，24h左右達(dá)最低點(diǎn)。
　　3、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺氧缺糖后MT分泌水平下降，24h左右達(dá)最低點(diǎn)，96h左右恢復(fù)缺氧缺糖0h水平；miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后MT分泌水平下降，72h趨于穩(wěn)定；miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后行缺氧缺糖實(shí)驗(yàn)，

5、MT分泌水平下降，24h及48h之間達(dá)最低點(diǎn)。
　　4、CCK8結(jié)果顯示，缺氧缺糖0.5h、1h后，細(xì)胞增長活力無明顯變化，缺氧缺糖2h后，可使松果體細(xì)胞獲得適度損傷，缺氧缺糖3h后，細(xì)胞活力明顯下降。
　　結(jié)論：
　　1.新生大鼠HIBD后松果體microRNA表達(dá)譜發(fā)生改變,其中miR-375明顯上調(diào)。
　　2.松果體細(xì)胞缺氧缺糖后miR-375、AANAT表達(dá)，分泌MT水平均發(fā)生變化。
　　3.松果體