腎草酸鈣及尿酸結(jié)石基質(zhì)蛋白的質(zhì)譜鑒定與分析.pdf

1、目的：
　　初步探討不同腎結(jié)石內(nèi)的蛋白質(zhì)組成差異，為后續(xù)進(jìn)一步探索結(jié)石內(nèi)蛋白質(zhì)在結(jié)石形成中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　收集2013年6月至2014年12月我院通過(guò)輸尿管鏡、經(jīng)皮腎鏡和腹腔鏡等手術(shù)方式取石術(shù)后臨床上尿路結(jié)石標(biāo)本共150例。經(jīng)三蒸水清洗20次、超凈工作臺(tái)晾干結(jié)石、充分碾磨結(jié)石標(biāo)本后，取微量（約500ug）結(jié)石粉末，采用結(jié)石紅外光譜分析儀分析結(jié)石組成成分；同時(shí)取1g結(jié)石粉末，加5ml R

2、IPA蛋白裂解液溶解蛋白，經(jīng)冷凍干燥濃縮蛋白，通過(guò)凝膠電泳技術(shù)對(duì)樣品蛋白質(zhì)進(jìn)行分離及純化，并采用考馬斯亮藍(lán)染色鑒別蛋白分子量大?。煌ㄟ^(guò)膠內(nèi)酶解后再抽提出肽段，經(jīng)液相色譜電離串聯(lián)質(zhì)譜（LC-ESI-MS/MS）技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)成份，并對(duì)質(zhì)譜結(jié)果進(jìn)行GO、Pathway初步的生物信息學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、在150例上尿路結(jié)石中，其中草酸鈣結(jié)石33例，尿酸結(jié)石12例，草酸鈣合并碳酸鈣結(jié)石66例，草酸鈣合并尿酸結(jié)石19例,草酸

3、鈣合并磷酸鈣20例。
　　2、SDS-PAGE電泳結(jié)果表：33例草酸鈣結(jié)石內(nèi)蛋白有3至4條蛋白帶，主要集中70-100KD,17-26 KD;12尿酸結(jié)石內(nèi)的蛋白質(zhì)有5-6條蛋白帶，主要集中70-100KD，30-40 KD，17-26 KD。
　　3、蛋白質(zhì)譜結(jié)果：草酸鈣結(jié)石內(nèi)有88種蛋白，尿酸結(jié)石內(nèi)有283種蛋白；GO分析、pathway結(jié)果表明：結(jié)石內(nèi)以結(jié)合功蛋白為主，占草酸鈣結(jié)石蛋白總數(shù)的45.8％，占尿酸結(jié)石蛋白總