RASSF10基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化可能是多西他賽耐藥的標(biāo)記并通過(guò)抑制P53信號(hào)通路而抑制肝癌的生長(zhǎng).pdf

1、背景:肝癌是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在男性中發(fā)病排第五位，在女性中排第九位，死亡率在全球癌癥相關(guān)死亡率排第二位。肝癌的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。異常的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)累積性改變被認(rèn)為是許多腫瘤的重要發(fā)病機(jī)制。在肝癌中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多異常的表觀遺傳學(xué)的變化。RAS家族蛋白是與GTP綁定的有著相同結(jié)構(gòu)域的蛋白，參與細(xì)胞的功能，如生長(zhǎng)、粘附、遷移、分化和凋亡等。RAS家族有10個(gè)成員，按照其N末端和C末端結(jié)構(gòu)分為兩組。C末端的RAS家族成

2、員在C端有RAS和SARAH結(jié)構(gòu)域(RASSF1-6)，N末端RAS家族成員只有RAS結(jié)構(gòu)域，而沒(méi)有SARAH結(jié)構(gòu)域(RASSF7-10)。RASSF10位于人類染色體11p15.2，許多腫瘤在這一區(qū)域發(fā)生了雜合性缺失。RASSF10在許多人類腫瘤中發(fā)生了甲基化。以前的研究發(fā)現(xiàn)RASSF10通過(guò)激活P53信號(hào)通路抑制結(jié)腸癌的生長(zhǎng)。本研究將探索RASSF10在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的表觀遺傳學(xué)改變及作用。
　　目的:檢測(cè)RASSF10在肝

3、癌中的甲基化情況，探討RASSF10對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡等功能的影響及作用機(jī)制。并分析RASSF10甲基化與肝癌的診斷和預(yù)后的關(guān)系。
　　材料與方法:本研究應(yīng)用10個(gè)肝癌細(xì)胞系(SNU182，SNU387，HBXF344，SNU475，HepG2，BEL7402，LM3，Huh7，PLC/PRF5和QGY7703)、69例原發(fā)性肝癌組織、31對(duì)原發(fā)性肝癌及配對(duì)的癌旁組織。應(yīng)用半定量RT-PCR、甲基化特異性PCR(MSP)、亞硫酸

4、鹽測(cè)序(BSSQ)、免疫組化(IHC)、MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)和蛋白免疫印跡雜交等技術(shù)分析RASSF10在肝癌細(xì)胞中的功能。
　　結(jié)果:RASSF10啟動(dòng)子區(qū)在SNU387，HBXF344，HepG2，PLC/PRF/5，Huh7，BEL7402，LM3和QGY7703細(xì)胞系中發(fā)生甲基化并且表達(dá)缺失，在SNU182和SNU475細(xì)胞中啟動(dòng)子區(qū)呈半甲基化狀態(tài)，且呈低豐度表達(dá)。5-aza處理后RASSF10不表達(dá)

5、或低表達(dá)的細(xì)胞株恢復(fù)表達(dá)，表明RASSF10的表達(dá)受到啟動(dòng)子區(qū)甲基化的調(diào)控。RASSF10在原發(fā)性肝癌組織的甲基化率為82.6％(57/69)，在正常肝組織不發(fā)生甲基化。RASSF10的甲基化與肝癌患者的腫瘤大小和TNM分級(jí)相關(guān)(P＜0.05)。在HepG2和QGY7703細(xì)胞恢復(fù)RASSF10的表達(dá)可以抑制細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡，誘導(dǎo)G2/M期細(xì)胞的阻滯。并可激活P53信號(hào)通路的活性，增加癌細(xì)胞對(duì)多西他賽的敏感性。
　　結(jié)論:RA