2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、Wnt 信號通路廣泛地涉及到機體的發(fā)育過程與腫瘤的發(fā)生。目前有關(guān)Wnt 信號通路的研究主要集中于Wnt 下游信號的異常表現(xiàn),如β-catenin,APC,GSK-3β,CTNNB1及axin基因突變等。而對于Wnt 信號通路的上游信號(Wnt蛋白及其抑制物等)的異常改變與腫瘤發(fā)生的關(guān)系的研究相對較少。Wnt蛋白的表達在膀胱尿路上皮惡變過程中明顯增加:淺表性膀胱腫瘤高于正常膀胱粘膜,而且明顯高于侵襲性膀胱癌,這提示W(wǎng)nt 信號通路與膀胱癌

2、發(fā)生有關(guān)。而Wnt 信號通路下游分子,如APC和β-catenin的遺傳學改變在膀胱癌中比較少見。因此,我們推測膀胱癌Wnt 信號通路上游水平的異常改變可能是激活該通路的主要原因。WIF-1 (Wnt inhibitory factor-1)是Wnt 信號通路抑制物之一,它可通過直接與Wnt 信號蛋白結(jié)合而抑制Wnt 信號通路。膀胱癌WIF-1表達下調(diào),但其機制及其生物學效應(yīng)尚不清楚。
   一.目的:
   1.探討膀

3、胱癌Wnt 信號途徑上游關(guān)鍵調(diào)控分子WIF-1 啟動子甲基化是否為抑制WIF-1 表達的主要原因;研究WIF-1 重新表達后對膀胱癌細胞的影響。
   2.探討WIF-1的重表達與喜樹堿細胞毒性之間的關(guān)系,觀察膀胱癌WIF-1基因重表達后HCPT 抗癌效應(yīng)的變化,探討5-aza-dc與HCPT 可能協(xié)同作用的機制。
   3.探討WIF-1 啟動子甲基化狀態(tài)與膀胱癌的臨床病理關(guān)系,進一步明確WIF-1啟動子甲基化與膀胱癌

4、的關(guān)系,分析WIF-1 甲基化可否作為判斷膀胱癌患者的預后以及早期診斷的分子標志物。
   二.方法:
   1.通過RT-PCR檢測Wnt1,Wnt5a,Wnt10b和Wnt13的mRNA在膀胱癌細胞株BIU87和T24的表達情況;通過免疫組織化學技術(shù)檢測Wnt1在正常膀胱上皮和膀胱癌的表達情況;
   2.通過RT-PCR、免疫細胞化學以及Western-blot 等方法檢測膀胱癌細胞株BIU87和T24的W

5、IF-1的表達情況。
   3.甲基化抑制劑5-aza-dc處理膀胱癌細胞株BIU87和T24,通過甲基化特異性PCR(MSP)方法檢測膀胱癌細胞WIF-1基因在5-aza-dc處理前后的甲基化狀態(tài)的變化;
   4.5-aza-dc處理膀胱癌細胞BIU87和T24 后,通過MTT 法,流式細胞儀分析(Annexin Ⅴ/PI 雙染法)和TUNEL 法檢測膀胱癌細胞的生長抑制及凋亡情況;
   5.不同濃度的5-

6、aza-dc和羥基喜樹堿聯(lián)合處理膀胱癌細胞株BIU87、T24 以及體外原代培養(yǎng)膀胱癌細胞,通過MTT 法檢測它們的細胞毒性。等效線圖解法分析它們的聯(lián)合效應(yīng);
   6.流式細胞儀分析(Annexin Ⅴ/PI 雙染法)和TUNEL 法檢測5-aza-dc和羥基喜樹堿對膀胱癌細胞的誘導凋亡效應(yīng);RT-PCR 法檢測兩藥聯(lián)合作用時對WIF-1表達的影響;
   7.MSP 法檢測膀胱癌組織,正常膀胱組織以及腺性膀胱炎組織標

7、本的WIF-1 甲基狀態(tài);免疫組織化學技術(shù)檢測上述組織WIF-1蛋白表達情況。SPSS12.0 進行統(tǒng)計分析。
   三.結(jié)果:
   1.BIU87和T24的Wnt 表達情況不盡相同:它們均不表達Wnt1;均表達Wnt13;
   BIU87 不表達Wnt5a,但T24 表達;Wnt1在不同分化程度的膀胱癌以及正常膀胱上皮中均不表達;
   2.正常培養(yǎng)條件下的膀胱癌細胞株BIU87和T24 均不表達W

8、IF-1。在5-aza-dc(5μM)作用72小時后,BIU87和T24 均表達WIF-1。
   3.MTT 法顯示5-aza-dc 對膀胱癌細胞有明顯的生長抑制作用,與空白對照組比較,差異有顯著性意義(p<0.05),兩株膀胱癌細胞T24和BIU87 之間無顯著性差異。
   5-aza-dc作用72小時后的兩種膀胱癌細胞株的凋亡率,與空白對照組比較有顯著性差異。
   4.WIF-1 mRNA的表達不受HC

9、PT的影響,而且HCPT 單獨作用于膀胱癌細胞并不能恢復WIF-1的表達。
   5.5-aza-dc和HCPT 對膀胱癌細胞有劑量依賴性細胞毒性(p<0.01),兩藥產(chǎn)生了明顯的協(xié)同作用;而且2種膀胱癌細胞株與原代培養(yǎng)的3 株膀胱癌細胞表現(xiàn)出類似的效果。WIF-1 重表達后可以增加HCPT 誘導膀胱癌細胞的凋亡。
   6.WIF-1 啟動子甲基化陽性率腫瘤分級的增加逐漸升高(G1、G2、G3 級分別為20.0[%]、

10、56.3[%]和86.7[%]),組間比較有顯著性差異(p<0.05);淺表性和浸潤性腫瘤的WIF-1 啟動子甲基化陽性率也有顯著性差異(P<0.05)。通過Kaplan Meier分析顯示W(wǎng)IF-1 啟動子甲基化與未甲基化兩組之間的5年總生存率分別為60.6[%]和91.7[%](p<0.05)。
   7.正常膀胱組織的WIF-1蛋白表達率為92.3[%];腺性膀胱炎的WIF-1蛋白表達率為85[%],兩者之間無明顯差異(p

11、>0.05)。膀胱癌組織WIF-1蛋白總體表達率為30.1[%],明顯低于正常膀胱和腺性膀胱炎的表達率(P<0.01)。WIF-1在淺表性和浸潤性腫瘤組織中的表達有顯著性差異(p<0.05),而且隨腫瘤分級的增加WIF-1陽性表達率逐漸降低,高分化與低分化腫瘤之間差異非常明顯(P<0.01)。
   四.結(jié)論:
   1.膀胱癌WIF-1基因啟動子甲基化是抑制WIF-1 表達的主要機制;
   2.WIF-1基因

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