五味子醇甲對(duì)糖尿病勃起功能障礙大鼠勃起功能及平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化蛋白影響的研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志蛋白在大鼠陰莖海綿體表達(dá)明確糖尿病勃起功能障礙大鼠(Diabetes-inducederection dysfunction,DI ED)陰莖海綿體是否存在平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及表型轉(zhuǎn)化對(duì)勃起的影響；應(yīng)用藥物干預(yù)后，探索五味子醇甲對(duì)DIED大鼠勃起功能的影響及五味子醇甲與平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化蛋白之間的聯(lián)系。
　　方法:
　　1.篩選DIED大鼠：健康雄性SD大鼠100只(體質(zhì)量200±20g)

2、，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)取88只腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)溶液60mg/kg，余12只為正常對(duì)照組(NC)。72h后測(cè)定隨機(jī)血糖，若血糖＞16.7mmol/L視為糖尿病(DM)大鼠；繼續(xù)飼養(yǎng)8周，DM大鼠皮下注射阿撲嗎啡(APO)，30min內(nèi)未誘導(dǎo)陰莖勃起，視為糖尿病勃起功能障礙(DIED)大鼠；若出現(xiàn)勃起，視為單純DM組大鼠。
　　2.模型分組及藥物干預(yù)：將DIED大鼠隨機(jī)分為DIED組；五味子醇甲低劑量組(5mg/kg/d

3、)；五味子醇甲中劑量組(10mg/kg/d)；五味子醇甲高劑量組(20mg/kg/d)；另有NC組和DM組共6組；NC組、DM組、DIED組分別予以生理鹽水2ml/d灌胃8周，3個(gè)劑量藥物組予以相應(yīng)劑量五味子醇甲灌胃8周，每日1次。
　　3.灌胃8周后麻醉大鼠，電刺激大鼠陰莖海綿體神經(jīng)檢測(cè)陰莖海綿體內(nèi)壓(ICP)、頸動(dòng)脈內(nèi)壓(MAP)。
　　4.取血測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、血

4、肌酐(Scr)水平。
　　5.斷頭處死，取陰莖海綿體組織，一部分用免疫組化法觀察陰莖海綿體內(nèi)平滑肌肌動(dòng)蛋白-α(SMA-α)水平；另一部分用Western Blot測(cè)定陰莖海綿體內(nèi)SMA-α，骨橋蛋白(OPN)蛋白表達(dá)水平。
　　6.數(shù)據(jù)分析：所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS23.0軟件分析，數(shù)據(jù)描述用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。對(duì)正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較采用LSD、SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05認(rèn)

5、為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠體質(zhì)量及血糖變化：與NC組相比，灌胃前DM組、DIED組，低、中、高劑量藥物組大鼠體質(zhì)量均明顯下降，血糖顯著增高(P＜0.05)；除 NC組外，上述各組間兩兩相比，大鼠體質(zhì)量及血糖無(wú)顯著差異(P＞0.05)。灌胃8周后，DM組、DIED組，低、中、高劑量藥物組大鼠體質(zhì)量均明顯下降，血糖顯著升高(P＜0.05)，除NC組外，上述各組間兩兩相比，大鼠體質(zhì)量及血糖無(wú)顯著差異(P＞0

6、.05)。
　　2.電刺激前，各組間的基礎(chǔ)ICP無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；電刺激時(shí)，各組間MAP值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);電刺激時(shí)，與NC組相比，DM、DIED組大鼠ICP及ICP/MAP依次遞減(P＜0.05)；與DIED組相比，低劑量藥物組ICP及ICP/MAP無(wú)明顯改變(P＞0.05)，中、高劑量藥物組ICP及ICP/MAP依次遞增(P＜0.05)，高劑量藥物組上升幅度最大。
　　3.各組大鼠間 ALT、AS

7、T、ALP及Scr水平均無(wú)明顯差異(P>0.05)
　　4.免疫組化結(jié)果如圖所示，與NC組比較，SMA-α在DM組、DIED組表達(dá)依次遞減(P＜0.05)；與 DIED組比較，SMA-α在低、中、高劑量藥物組表達(dá)依次遞增(P＜0.05)，且不同劑量藥物組SMA-α表達(dá)均低于NC組(P＜0.05)。
　　5.Western Blot結(jié)果
　　SMA-α蛋白表達(dá)：與NC組相比， DM組和DIED組陰莖海綿體中SMA-α蛋白

8、含量減少(P<0.05)，其中DIED組SMA-α蛋白含量最少(P<0.05)；與DIED組相比，低、中、高劑量藥物組SMA-α蛋白含量均高于DIED組(P<0.05)，其中高劑量藥物組SMA-α含量最高，中劑量組次之，再者為低劑量組；不同劑量藥物組蛋白含量均低于NC組(P<0.05)。
　　OPN蛋白表達(dá)：與NC組相比，DM組和DIED組陰莖海綿體中OPN蛋白含量增多(P<0.05)，其中DIED組OPN蛋白含量最多(P<0.0

9、5)；與DIED組相比，低、中、高劑量藥物組OPN蛋白含量均低于DIED組(P<0.05)，但不同劑量藥物組間兩兩比較OPN蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)；DM組陰莖海綿體中OPN蛋白含量是除NC組外最低者(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.DIED大鼠陰莖海綿體可能存在平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化；隨表型轉(zhuǎn)化程度不同可能造成勃起功能障礙。
　　2.五味子醇甲干預(yù)后可以改善DIED大鼠勃起功能；五味子醇甲提高勃起功能的作