新生血管性青光眼患者血清及房水中VEGF、EPO的表達研究.pdf

1、新生血管性青光眼（nonvascular glaucoma，NVG）是由于虹膜表面及前房角新生血管長入，使得小梁網(wǎng)和周邊的虹膜組織互相粘連，引起眼球內(nèi)眼壓升高而出現(xiàn)的一種常見的繼發(fā)性青光眼。其 VG的形成的病理過程是眼部在缺血缺氧或炎癥的反復刺激下，纖維結(jié)締組織在前房及虹膜內(nèi)生長同時伴有新生血管的形成，病變的進一步發(fā)展會使得小梁網(wǎng)發(fā)生粘連，阻塞了房水的流出通道，導致眼壓的升高。視網(wǎng)膜的缺血缺氧在高眼壓的狀態(tài)下繼續(xù)加重，刺激新生血管形成，

2、使得視神經(jīng)和視功能受到影響，加重視力損害，對患者的生活質(zhì)量受到較大的影響。該病常繼發(fā)于視網(wǎng)膜靜脈阻塞(retinal vein occlusion，RVO)、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)及視網(wǎng)膜缺血綜合征等疾病，同時一般的抗青光眼藥物及手術(shù)治療效果差，也被稱為難治性青光眼的一種。目前有研究表明缺血和缺氧共同作用可導致虹膜及房角新生血管的產(chǎn)生。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelia

3、l growth factor，VEGF)是一種血管通透性誘導因子和有效的血管形成因子，除了具有促進內(nèi)皮細胞增殖的功能外，還有著內(nèi)皮細胞的特異性有絲分裂原的功能。促紅細胞生成素(erythropoietin，EPO)主要來源于胎兒的肝臟及成人的腎臟，是一種含唾液酸的酸性熱穩(wěn)定(80℃)糖蛋白，是生成正常紅細胞所必須的激素。當組織受到外界不良刺激后 EPO作為一種組織保護性因子，一改平時的靜息狀態(tài)會迅速表達，周圍組織中的血管內(nèi)皮細胞在其自

4、分泌或旁分泌的方式刺激下生長，促進新生血管的形成。近些年來，國內(nèi)、外對糖尿病視網(wǎng)膜病變中房水、玻璃體VEGF等相關(guān)因子的研究較多，而對NVG患者血液、房水中EPO水平的研究甚少。NVG所致的視盤血流灌注不足及組織缺血是否促使了EPO的釋放?VEGF是一種重要的血管生長因子，在正常視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)的發(fā)育中發(fā)揮作用，而在視網(wǎng)膜缺血性病變及某些非缺血性病變引起的新生血管性青光眼中可能同樣發(fā)揮重要的作用。
　　目的：探討血管內(nèi)皮生長因子（V

5、EGF）及促紅細胞生成素（EPO）的表達水平與新生血管性青光眼的內(nèi)在聯(lián)系。
　　方法：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA法)檢測NVG患者血清及房水中的VEGF和EPO的含量。對NVG患者血清及房水中的VEGF、EPO細胞因子的水平進行檢測分析，觀察兩者與 N VG的關(guān)系。采用RT-PCR檢測技術(shù)對三組患者血清中VEGFmRNA和EPOmRNA的表達進行檢

6、測，進一步了解VEGF、EPO在NVG中的表達情況，為其早期診斷、治療(包括基因治療)防治提供一定的實驗依據(jù)。研究對象分為A、B、C三個組，每組患者20例。A組實驗組20例為新生血管性青光眼組，B組實驗組20例為原發(fā)性青光眼組，C組對照組20例為年齡相關(guān)性白內(nèi)障組（Age-rlateed cataract）。分別對所有的研究對象進行血清及房水樣本的采集。血清樣本在手術(shù)當天抽取靜脈血3-4ml后進行離心取0.3-0.4 ml；房水樣本在手

7、術(shù)中進行采集100-200μl。采用ELISA法分別測定血清與房水中VEGF、EPO血管因子的含量。采用RT-PCR檢測技術(shù)對三組患者血清中VEGFmRNA和EPO mRN A的相對表達進行檢測。實驗數(shù)據(jù)的管理和分析采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行，用均數(shù)±標準差（x±s）對數(shù)據(jù)統(tǒng)計描述，應用單因素方差分析（ANOVA）對不同組間的VEGF及EPO表達進行比較；同組內(nèi)同一因子在不同標本間的水平較用配對樣本t檢驗；應用Pearson相關(guān)分

8、析對同一組患者血清及房水樣本的VEGF及EPO表達進行比較檢測其相關(guān)性。
　　結(jié)果：⑴血清中VEGF的濃度水平：A組506.28±40.75 p g/ml、B組342.73±21.75 pg/ml和C組176.05±16.43pg/ml，三組兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（F=680.667，P<0.001）。⑵血清中EPO的濃度水平：A組23.91±2.29 IU/L、B組23.38±2.24 IU/L和C組24.42±3.42

9、 IU/L，三組間差異無統(tǒng)計學意義（F=0.773，P>0.05）。⑶房水中VEGF的濃度水平：A組1120.49±162.94pg/ml、B組360.55±20.68pg/ml和C組175.01±17.06pg/ml，三組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F=552.247，P<0.001）。⑷房水中EPO的濃度水平：A組171.28±13.68U/L、B組45.14±4.56 IU/L和C組25.33±2.45 IU/L，三組兩兩比較，

10、差異均有統(tǒng)計學意義（F=1757.436，P<0.001）。⑸在A組，房水VEGF水平1120.49±162.94 pg/ml明顯高于血清中506.28±40.75 pg/ml的水平，差異有統(tǒng)計學意義（t=15.336，P<0.001）。在B組中,房水VEGF水平360.55±20.68pg/ml高于血清中342.73±21.75 p g/ml的水平，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.568，P<0.05）。在C組中，血清與房水之間的濃度無統(tǒng)計

11、學意義（t=0.277，P>0.05）。⑹在A組中，房水EPO水平171.28±13.68 IU/L明顯高于血清中23.91±2.29IU/L的水平，差異有統(tǒng)計學意義（t=44.65，P<0.001）。在B組中，房水 EPO水平（45.14±4.56 IU/L）高于血清中（23.38±2.24 IU/L）的水平，差異有統(tǒng)計學意義（t=18.95，P<0.001）。在C組中，房水與血清中的濃度無明顯差異，無統(tǒng)計學意義（t=1.558，P>

12、0.05）。⑺VEGF和EPO濃度在新生血管性青光眼房水中無明顯相關(guān)性（r=-0.182，P>0.05）。⑻血清中VEGFmRNA相對表達量：三組兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。⑼血清中EPOmRNA相對表達量：三組間差異無統(tǒng)計學意義（F=0.093，P>0.05）。
　　結(jié)論：①VEGF和EPO局部濃度的升高與新生血管性青光眼患者虹膜新生血管有關(guān)。②VEGF、EPO眼內(nèi)局部濃度的升高與高眼壓及缺氧有關(guān)。③VEG