Tau蛋白與實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)軸索損傷的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　研究非磷酸化和磷酸化兩種不同形式tau蛋白在實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠腦組織軸索中不同時期動態(tài)變化及意義。
　　方法：
　　將72只體重18g~20g購自北京維通利華實驗動物有限公司年齡為8周~10周的C57BL/6雌性小鼠隨機分為6組,每組12只。按免疫第14天、25天、50天癱瘓程度不同分別定義為急性期、癱瘓期、緩解期小鼠，將6組依次編為EAE急性期組、EAE癱瘓期組、EAE緩解期組、對照急

2、性期組、對照癱瘓期組、對照緩解期組。在免疫第14、25、50天，將每組小鼠12只隨機分為兩組，每組6只。按每只小鼠需MOG35-55100ug計算出36只小鼠共需MOG量。將稀釋為3mg/mlMOG與等體積CFA混合,再加入一定量的結(jié)核分枝桿菌素,以刺激免疫，將此液體混合物放入針頭注射器中反復(fù)抽吸，直至混合物呈現(xiàn)渾濁樣改變。在EAE組小鼠脊柱兩側(cè)多點注射乳劑，每只注射總量0.3ml，并在免疫第0天、第2天每只腹腔注射500ng百日咳毒素

3、,作為免疫增強劑。對照組每只小鼠給予與實驗組等量生理鹽水注射作為對照。從免疫當(dāng)日起,對小鼠進行每日評分，直至小鼠處死前，評分采用國際通用5分評分標(biāo)準(zhǔn)。對小鼠腦組織進行固定、包埋，用HE染色觀察組織炎癥變化，用免疫組化方法觀察不同時期軸索tau蛋白含量變化；用ELISA法測量小鼠血清中GSK3濃度。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠國際通用5分評分法,小鼠逐漸出現(xiàn)以下情況，尾部無力，由于食欲減退出現(xiàn)皮毛光澤下降；病情逐漸加重出現(xiàn)雙后肢

4、肌張力降低及小腦功能受損出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，但不影響其日常運動；小鼠表現(xiàn)為雙后肢無力加重，影響日常運動，被動翻身后不能恢復(fù)，但刺激后可挪動；小鼠表現(xiàn)為雙后肢完全癱瘓，同時前肢出現(xiàn)肌力減弱；小鼠表現(xiàn)為無任何肢體運動，不能完成進食，但無死亡小鼠。免疫緩解期四肢無力較前緩解。神經(jīng)功能評分隨時間推移達到高分后，當(dāng)疾病進入緩解期時評分下降。2.對照組腦組織急性期、癱瘓期未見明顯異常，緩解期組可見生理性軸索萎縮。EAE組急性期腦組織可見炎癥細胞呈血管套樣

5、浸潤；癱瘓期除可見大量炎癥細胞浸潤外，出現(xiàn)白質(zhì)結(jié)構(gòu)松散、組織空泡化；緩解期炎癥細胞浸潤量有所下降，但遺留軸索萎縮。3.陽性軸索表現(xiàn)為腫脹、深染，縱切面呈梭形節(jié)段狀，橫切面呈點狀，節(jié)段狀軸索分節(jié)計數(shù)，計數(shù)軸索陽性數(shù)，對照急性期組、癱瘓期組、緩解期組軸索內(nèi)磷酸化tau蛋白表達數(shù)分別為4.09±1.09、5.82±1.32、7.55±1.62；EAE急性期組、癱瘓組、緩解期磷酸化tau蛋白表達量28.40±2.60、48.40±3.81、29

6、.42±1.07；EAE癱瘓期組高于EAE急性期組（P<0.01），高于EAE緩解期組（P<0.01）。4.將每組各6只小鼠血清GSK3對比，EAE組較對照組增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），EAE組癱瘓期較急性期、緩解期水平高（P<0.01）。5.EAE組小鼠癱瘓期、緩解期血清GSK3與腦組織磷酸化Tau蛋白兩者間存在線性相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　磷酸化tau蛋白含量與小鼠神經(jīng)功能評分相關(guān)。磷酸化tau蛋白含量和軸