CathepsinL通過調(diào)節(jié)Bim的表達(dá)影響Rotenone誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元凋亡.pdf

1、目的：
　　觀察魚藤酮（Rotenone，Rot）誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元凋亡中組織蛋白酶L(Cathepsin L，CTSL）和Bcl-2家族成員BH3-only蛋白Bim（Bcl-2 interacting mediator of cell death，Bim）表達(dá)的變化，并探究兩者的關(guān)系；闡明干擾Cathepsin L發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)的作用機(jī)制。
　　方法：
　　采用Rotenone誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，Western

2、blot和免疫熒光法檢測在Rotenone的刺激下PC12細(xì)胞中Cathepsin L、Bim、Egr-1的蛋白表達(dá)變化；Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst33258染色法檢測干擾Cathepsin L或Bim對(duì)Rotenone誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用；Western blot和免疫熒光法檢測干擾或過表達(dá)Cathepsin L對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bim、 Egr-1、B-Myb表達(dá)的影響；采用側(cè)腦室給藥法

3、進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，免疫組化法檢測Cathepsin L抑制劑Z-FF-FMK對(duì)Rotenone引起的神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用及Cathepsin L、Bim表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　在Rotenone刺激下，PC12細(xì)胞中Cathepsin L從2h起表達(dá)明顯，Bim在3h時(shí)表達(dá)明顯。干擾Cathepsin L顯著地減少Rotenone誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡和Bim表達(dá)的增強(qiáng)；而過表達(dá)Cathepsin L則增加了PC12細(xì)胞內(nèi)

4、Bim的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Cathepsin L能調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子B-Myb進(jìn)而調(diào)節(jié)Bim，而不影響Egr-1的表達(dá)。抑制Cathepsin L減少了Rotenone誘導(dǎo)的大鼠多巴胺能神經(jīng)元的凋亡和Bim的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　干擾Cathepsin L對(duì)Rotenone誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元的凋亡具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是通過影響轉(zhuǎn)錄因子B-Myb的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而抑制了凋亡蛋白Bim的表達(dá)，從而抑制神經(jīng)元凋亡；而過表達(dá)Cat