白藜蘆醇體外抑制腸道病毒71型的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：體外篩選抑制腸道病毒71型（EV71）的有效中藥單體，探討白藜蘆醇抗EV71的效應(yīng)與分子作用機(jī)制。
　　方法：（1）噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)幾種常見(jiàn)解熱抗炎中藥單體和對(duì)照藥物利巴韋林對(duì)橫紋肌肉瘤（RD）細(xì)胞的毒性，以及對(duì)EV71的病毒抑制率；（2）EV71感染RD細(xì)胞后，Reed-Muench法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)EV71組、DMSO組、EV71+白藜蘆醇組和EV71+利巴韋林組的RD細(xì)胞培養(yǎng)上清液的病毒滴度（TCID50）；（

2、3）Western blot方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn) EV71感染組和 EV71+白藜蘆醇處理組的IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65總蛋白及其磷酸化水平，以及EV71衣殼蛋白VP1的表達(dá)水平；（4）Luminex液相芯片技術(shù)檢測(cè)EV71感染組與白藜蘆醇干預(yù)組中RD細(xì)胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β細(xì)胞因子水平。
　　結(jié)果：（1）連翹苷、人參皂苷rh1、黃芩素、虎杖苷、白

3、藜蘆醇和利巴韋林對(duì)RD細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度（CC50）分別為849.57μg/ml、2766.54μg/ml、140.13μg/ml、532.60μg/ml、82.0μg/ml和3577.03μg/ml；（2）利巴韋林（125μg/ml）體外對(duì)EV71的抑制率達(dá)78.27％；連翹苷和人參皂苷rh1都未表現(xiàn)出明顯的抑制EV71的作用；虎杖苷與黃芩素對(duì) EV71的抑制作用較弱，接近無(wú)毒濃度的虎杖苷（200μg/ml）和黃芩素（31.25μg/

4、ml）對(duì)EV71的抑制率分別為18.69±1.30%和31.91±1.27%；而白藜蘆醇具有較好的抗 EV71效應(yīng)，31.25μg/ml時(shí)抑制率高達(dá)73.28±6.33%，半數(shù)抑制濃度（IC50）為20.70μg/ml（病毒吸附后加藥），治療指數(shù)（TI）為3.96；（3）與EV71感染組比較，8h、12h、24h時(shí)白藜蘆醇可明顯抑制RD細(xì)胞中EV71/VP1合成（P＜0.05）；白藜蘆醇處理后可使RD細(xì)胞培養(yǎng)上清液中EV71滴度下降（P

5、＜0.05）；（4） EV71感染可激活RD細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路，IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平隨感染時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，而白藜蘆醇可顯著抑制 IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平（P＜0.05）；（5）白藜蘆醇可顯著降低EV71感染后RD細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β（P＜0.05），而對(duì)IL-2和IFN-α無(wú)作用（P＞0