版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、第一部分:利用雙色熒光蛋白示蹤的人腦膠質(zhì)瘤模型探討腫瘤血管形成中的細(xì)胞融合問題
目的:腫瘤血管生成被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的生物學(xué)現(xiàn)象,是決定疾病轉(zhuǎn)歸的重要因素。已經(jīng)證實(shí)在體內(nèi)外人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞參與血管形成,但具體機(jī)制未明,本實(shí)驗(yàn)旨在探討人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞同宿主細(xì)胞相互融合在腫瘤血管形成中重要作用。
方法:采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立表達(dá)紅色熒光蛋白(RFP)的人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞SU3-RFP,同宿主表達(dá)綠色熒光蛋白(
2、GFP)的裸小鼠構(gòu)建人腦膠質(zhì)瘤原位移植模型,用組織壓片、切片的方法,利用熒光顯微鏡和熒光掃描激光共聚焦顯微鏡觀察宿主正常腦組織和移植瘤組織中的血管形態(tài)和組成血管的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
結(jié)果:在正常腦組織,壓片法可見到類似于注射了血管造影劑樣清晰的各級血管的形態(tài),并根據(jù)組織部位,可大致判斷血管的形態(tài)學(xué)特征;在腫瘤組織,壓片法可見到紅色的腫瘤血管,綠色的宿主血管,黃色的腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞共建的血管。在熒光掃描激光共聚焦顯微鏡下觀察腫瘤組
3、織冰凍切片,可分析血管壁的組織結(jié)構(gòu),無論是內(nèi)皮細(xì)胞還是平滑肌細(xì)胞都可見由紅色的腫瘤細(xì)胞、綠色的宿主細(xì)胞和黃色的腫瘤與宿主共建細(xì)胞共同組成。
結(jié)論:轉(zhuǎn)基因熒光蛋白示蹤的可移植性膠質(zhì)瘤模型,在研究膠質(zhì)瘤血管形成時(shí)可清晰了解腫瘤組織中的宿主血管、腫瘤血管和腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞共建的血管。在共建血管,除了在同一根血管上可區(qū)分紅色腫瘤細(xì)胞與綠色宿主細(xì)胞鑲嵌排列的馬賽克血管,還能見到在同一個細(xì)胞,既表達(dá)RFP又表達(dá)GFP的雙陽性(融合)細(xì)胞
4、,并且在腫瘤侵襲宿主周圍組織也見到這種反應(yīng),據(jù)此表明細(xì)胞融合是腫瘤血管形成的重要途徑。
第二部分:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞體外共培養(yǎng)研究腫瘤血管形成中的細(xì)胞融合問題
目的:獲取自身表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的近交裸小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs,體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)并鑒定其生物學(xué)特性,同轉(zhuǎn)染紅色熒光蛋白(RFP)基因的人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞SU3-RFP體外共培養(yǎng)探討兩種細(xì)胞融合反應(yīng)對腫瘤血管形成的
5、驅(qū)動作用。
方法:體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)基因的裸小鼠MSCs,利用測CCK-8生長曲線、集落形成實(shí)驗(yàn)、制備染色體、Rt-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞等技術(shù)觀察并鑒定骨髓間充質(zhì)細(xì)胞MSCs,取轉(zhuǎn)染紅色熒光蛋白(RFP)基因的人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞SU3-RFP與轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)基因的綠色裸小鼠MSCs,進(jìn)行體外共培養(yǎng),在熒光顯微鏡觀察融合細(xì)胞的增殖特性,并利用CCK-8生長曲線、Rt-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)、流
6、式細(xì)胞技術(shù)和轉(zhuǎn)分化實(shí)驗(yàn)來研究融合細(xì)胞的生物學(xué)特性及形成腫瘤血管的能力。
結(jié)果:MSCs在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)5代,高增殖活性基本不變,且表達(dá)CD105,不表達(dá)nestin、CD31,其生物學(xué)和遺傳學(xué)特征穩(wěn)定。隨著MSCs與SU3-RFP細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間的延長和傳代次數(shù)的增加,RFP+/GFP+黃色融合細(xì)胞的比例明顯增加。經(jīng)流式細(xì)胞儀篩選純化,RFP+/GFP+黃色融合細(xì)胞占83.7%±4.5%。其高增殖能力長期保持不變,且通過Rt-
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人腦膠質(zhì)瘤CD105表達(dá)和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在血管生成中的作用及機(jī)制初探.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤組織中腫瘤干細(xì)胞的分布特征.pdf
- MRP在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá).pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤中Ets-1表達(dá)與腫瘤血管生成、細(xì)胞增殖浸潤的關(guān)系.pdf
- IKKε在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與其促膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及侵襲的分子機(jī)制研究.pdf
- Zfx在人腦膠質(zhì)瘤中的功能研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤化療耐藥及其逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 血腦屏障緊密連接在人腦膠質(zhì)瘤中的變化及其分子機(jī)制.pdf
- 抗血管生成基因治療人腦膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤及其腫瘤干細(xì)胞Livin基因與化療耐藥關(guān)系研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤中CD133的表達(dá)及其意義.pdf
- 平瘤顆粒誘導(dǎo)人腦SHG-44膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)及其因子機(jī)制的初步研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞初步研究.pdf
- RhoC在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義.pdf
- PPARγ在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其激動劑對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長、凋亡的影響.pdf
- Survivin促進(jìn)膠質(zhì)瘤血管形成機(jī)制的研究.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤組織中EGFR、ABCG2表達(dá)分析及其在血管生成中的作用.pdf
- 人腦膠質(zhì)瘤中細(xì)胞因子分泌功能的研究.pdf
- GRP在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義.pdf
評論
0/150
提交評論