NSCLC-TKIs耐藥中miR-125a-5p與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf

1、目的：
　　探討NSCLC細(xì)胞中是否存在miR-125a-5p參與調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，從而導(dǎo)致其發(fā)生EGFR-TKIs耐藥，對miR-125a-5p與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在EGFR-TKIs耐藥中的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　方法：
　　運(yùn)用慢病毒感染技術(shù)感染耐厄洛替尼的NSCLC細(xì)胞株P(guān)C9ER，將其分為miR-125a-5p上調(diào)組（PC9ER-miR-125a-5p）和miR-125a-5p下調(diào)組（PC9ER-shRNA-miR

2、-125a-5p），鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，劃痕實(shí)驗(yàn)探討細(xì)胞遷移能力，采用Western blot及RT-PCR方法與厄洛替尼敏感的肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C9、耐厄洛替尼的肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C9ER比較各組細(xì)胞中EMT標(biāo)志物（E-cadherin、Vimentin、ZEB1、Snail）在蛋白及mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.相較于PC9ER及上調(diào)miR-125a-5p的PC9ER細(xì)胞，下調(diào)miR-125a-5p后， PC9ER細(xì)胞形

3、態(tài)發(fā)生長梭形轉(zhuǎn)變，且細(xì)胞大小差異較大；劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著時間推移，下調(diào)miR-125a-5p的PC9ER細(xì)胞劃痕間距明顯變窄。
　　2.在E-cadherin mRNA表達(dá)水平方面：PC9ER細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)較PC9細(xì)胞低（P<0.0001）；上調(diào)miR-125后，與PC9ER細(xì)胞相比其E-cadherin表達(dá)明顯增加（P<0.0001)；PC9ER-shRNA-miR-125a-5p細(xì)胞中 E-cadherin表達(dá)則

4、較PC9ER-miR-125a-5p細(xì)胞降低（P=0.03)；
　　3..檢測 Vimentin mRNA表達(dá)水平結(jié)果顯示：與PC9細(xì)胞相比，PC9ER細(xì)胞中Vimentin表達(dá)升高（P=0.03）；PC9ER-miR-125a-5p細(xì)胞相較于PC9ER細(xì)胞，Vimentin表達(dá)水平反而降低（P=0.03）；與PC9ER-miR-125a-5p細(xì)胞相比，下調(diào)miR-125a-5p細(xì)胞中Vimentin表達(dá)復(fù)升（P=0.007）；<

5、br>　　4.Snail、Zeb1 mRNA表達(dá)水平僅在PC9ER-miR-125a-5p及PC9ER-shRNA-miR-125a-5p兩組對比中存在顯著性差異：相較于PC9ER-miR-125a-5p細(xì)胞，Snail及Zeb1均在PC9ER-shRNA-miR-125a-5p中表達(dá)增加（P=0.0071，P=0.023）；
　　5.在蛋白水平表達(dá)方面：PC9及PC9ER-miR-125a-5p兩組細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)

6、上調(diào)，Vimentin、Snail、Zeb1均在PC9ER和PC9ER-shRNA-miR-125a-5p細(xì)胞中表達(dá)增加。
　　結(jié)論：
　　在耐厄洛替尼肺腺癌細(xì)胞中，miR-125a-5p可引起EMT相應(yīng)的繼發(fā)性改變。伴隨著間質(zhì)特征性蛋Vimentin及EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、Zeb1表達(dá)增加、上皮特征性蛋白E-cadherin表達(dá)降低；miR-125a-5p參與調(diào)控EMT過程，可能是NSCLC-TKIs耐藥的原因之一