miR-200c在膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)miR-200c在膀胱癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況，并且通過上調(diào)或下調(diào)miR-200c在膀胱癌T24細(xì)胞中的表達(dá)來探索miR-200c對(duì)膀胱癌細(xì)胞株侵襲遷移能力的影響及miR-200c與Zebl構(gòu)成的雙向負(fù)反饋調(diào)節(jié)通路對(duì)膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲遷移能力的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　1.選取膀胱上皮永生化細(xì)胞SV-HUC-1、膀胱癌細(xì)胞T24、5637，通過RT-PCR檢測(cè)各細(xì)胞系內(nèi)

2、miR-200c的表達(dá)情況。
　　2.對(duì)膀胱癌細(xì)胞系T24進(jìn)行RT-PCR及Western blot檢測(cè)ZEBl基因的表達(dá)，同時(shí)劃痕試驗(yàn)、Transwell法檢測(cè)T24細(xì)胞的侵襲遷移能力，驗(yàn)證ZEB1與腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移能力的關(guān)系；
　　3.利用脂質(zhì)體 Lipofectamin2000將人工合成的 miR-200c過表達(dá)質(zhì)粒及miR-200c抑制劑轉(zhuǎn)染至膀胱癌T24細(xì)胞中，觀察ZEB1基因表達(dá)水平的變化及其對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和腫

3、瘤細(xì)胞侵襲及遷移能力的調(diào)控。
　　4.構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)ZEB1的T24細(xì)胞株，觀察ZEB1過表達(dá)后miR-200c表達(dá)水平的變化及T24細(xì)胞侵襲遷移能力和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與膀胱上皮永生化細(xì)胞 SV-HUC-1相比，膀胱癌細(xì)胞 T24、5637中miR-200c呈低表達(dá)；與分化較好、級(jí)別較低的膀胱癌細(xì)胞5637相比，T24細(xì)胞內(nèi)miR-200c的表達(dá)水平約為其1/4。
　　2. miR-20

4、0c過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)然組與對(duì)照組相比，前者細(xì)胞表達(dá)ZEB1的水平明顯降低，且腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力受到明顯抑制，E-cadherin表達(dá)上調(diào)， Vimentin表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化；miR-200c抑制劑轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組相比，前者 ZEB1的表達(dá)水平明顯增加，且腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力增強(qiáng)， E-cadherin表達(dá)降低， Vimentin表達(dá)增加，細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
　　3.與對(duì)照組相比，過表達(dá)ZEB1的T24細(xì)胞miR-

5、200c的表達(dá)水平下降，細(xì)胞侵襲遷移能力增強(qiáng)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)，Vimentin表達(dá)增加，細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
　　結(jié)論：
　　1. miR-200c在高級(jí)別、低分化的膀胱癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，提示miR-200c可作為腫瘤抑制因子。
　　2. miR-200c可抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力，miR-200c在膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。
　　3. miR-200c與ZEB1形成了的雙向抑制的