miRNA-141與lncRNA-HOTAIR相互作用調(diào)控TGF-β2誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究miRNA-141和lncRNA-HOTAIR在膀胱癌中的表達(dá)情況、相互作用機(jī)制及其通過調(diào)控TGF-β2對(duì)膀胱癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響，探討它們作為膀胱癌腫瘤標(biāo)志物及基因治療靶點(diǎn)的可行性。
　　方法：
　　1、采用RT-QPCR法分別檢測(cè)比較8例非浸潤(rùn)性膀胱癌組織和8例浸潤(rùn)性膀胱癌組織中的miRNA-141和lncRNA-HOTAIR表達(dá)情況，并探討二者在膀胱癌組織中表達(dá)的相關(guān)性；
　

2、　2、在膀胱癌細(xì)胞株5637和EJ中上調(diào)或下調(diào)miRNA-141和lncRNA-HOTAIR表達(dá)水平后分別檢測(cè)其對(duì)相互之間的影響來探索它們之間調(diào)控的關(guān)系；
　　3、采用RT-QPCR法和Western Blot法分別檢測(cè)在膀胱癌細(xì)胞株5637和EJ中上調(diào)miRNA-141、下調(diào)lncRNA-HOTAIR及其相互作用對(duì)TGF-β2表達(dá)水平影響；在膀胱癌EJ細(xì)胞中上調(diào)miRNA-141表達(dá)后采用Western Blot法檢測(cè)其對(duì)膀胱癌

3、細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的影響，運(yùn)用Transwell實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲、遷移能力影響。
　　結(jié)果：
　　1、與非浸潤(rùn)性膀胱癌組織相比較,浸潤(rùn)性膀胱癌組織中miRNA-141表達(dá)水平下調(diào)77.89％,lncRNA-HOTAIR表達(dá)水平上調(diào)4.34倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且miRNA-141和lncRNA-HOTAIR在膀胱癌中表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=-0.66,P＜0.01

4、）；
　　2、miRNA-141 mimic或 inhibitor（實(shí)驗(yàn)組）、miRNA-NC（陰性對(duì)照組）轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞后，實(shí)驗(yàn)組lncRNA-HOTAIR表達(dá)水平與control組相比表現(xiàn)下降或上升趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而NC組與control組相比無明顯變化，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；siRNA-HOTAIR（實(shí)驗(yàn)組）、siRNA-NC（陰性對(duì)照組）轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞后，實(shí)驗(yàn)組miRNA-141表達(dá)

5、水平與control組相比表現(xiàn)上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而NC組與control組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　3、miRNA-141 mimic轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞5637和EJ后，TGF-β2表達(dá)水平出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；siRNA-HOTAIR轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞5637和EJ后， TGF-β2表達(dá)水平出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；miRNA-141 inh

6、ibitor和miR-141 inhibitor+siRNA-HOTAIR分別轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞5637和EJ后，與control組相比，miRNA-141 inhibitor增加TGF-β2的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與miRNA-141 inhibitor組相比，miRNA-141 inhibitor+siRNA-HOTAIR組能夠抑制TGF-β2表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。miRNA-141 mimic轉(zhuǎn)

7、染膀胱癌細(xì)胞EJ后，Western blot法檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白：與control組相比，Vimentin下降，E-cadherin上升，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Transwell實(shí)驗(yàn):EJ細(xì)胞的穿膜數(shù)目下降，與control組相比，差別具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：EJ細(xì)胞遷移距離小于control組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、miRNA-141表達(dá)隨膀胱癌

8、組織惡性程度增高而降低，lncRNA-HOTAIR表達(dá)隨膀胱癌組織惡性程度增高而增高，它們可能在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，是膀胱癌潛在的腫瘤標(biāo)記物。
　　2、miRNA-141與lncRNA-HOTAIR在膀胱癌細(xì)胞中存在著相互抑制的作用，這使miRNA-lncRNA互相作用機(jī)制可成為膀胱癌基因調(diào)控研究的新方向。
　　3、miRNA-141和 lncRNA-HOTAIR相互作用調(diào)控著TGF-β2在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)，從而影