LAMP3介導上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在絨癌侵襲遷移中的作用及機制研究.pdf

1、由于有效治療措施如化療的出現(xiàn)及人絨毛膜促性腺激素作為腫瘤標記物的廣泛應用，妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤（Gestational trophoblastic neoplasia，GTN）成為有可能僅依靠化療治愈的第一個婦科實體瘤，也是人類最早得以治愈的實體瘤之一。然而，仍然會有患者因為出現(xiàn)化療耐藥和多發(fā)轉(zhuǎn)移而導致疾病進展。其中，轉(zhuǎn)移性滋養(yǎng)細胞腫瘤主要經(jīng)血行播散，轉(zhuǎn)移發(fā)生早而且廣泛，可同時出現(xiàn)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶，而且很多患者原發(fā)灶消失，僅表現(xiàn)為轉(zhuǎn)移灶癥狀，

2、使疾病的診斷和治療都變得更加困難。近年來學術界普遍認為，絨癌轉(zhuǎn)移是多基因、多信號通路共同作用的結(jié)果，但具體機制尚不明確。因此，探討絨癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生機制，尋找阻斷或逆轉(zhuǎn)絨癌侵襲的新靶點，對改善絨癌患者的預后具有重要的臨床意義。
　　溶酶體相關膜蛋白3(lysosomal associated membrane protein3，LAMP3)是一種高度糖基化的完整跨膜蛋白，主要位于細胞內(nèi)的溶酶體膜上，其僅僅在少數(shù)幾種細胞或者某些細胞

3、的特定分化階段表達。但是最近相關的體內(nèi)體外試驗均發(fā)現(xiàn)，LAMP3可能在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用，與腫瘤的預后不良密切相關。亦有研究發(fā)現(xiàn)LAMP3是一種新的低氧調(diào)節(jié)基因，參與低氧誘導的腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。文獻報道低氧也可以誘導絨癌細胞發(fā)生EMT。LAMP3作為新的低氧調(diào)節(jié)基因是否在絨癌細胞的EMT中發(fā)揮作用需要進一步的研究。
　　首先，本研究通過RT-PCR和免疫印跡法發(fā)現(xiàn)絨癌細胞JEG-3中LAMP3的mRNA和蛋白表達水平明

4、顯低于HTR-8/SVneo(P＜0.05)，而HTR-8/SVneo被公認為具有更強的侵襲能力，提示LAMP3的表達水平與細胞侵襲能力呈正相關。同時，通過CCK-8、RT-PCR、免疫印跡法和體外侵襲遷移實驗如Transwell、劃痕實驗等研究發(fā)現(xiàn)低氧誘導后絨癌細胞JEG-3中LAMP3的表達增加，細胞侵襲遷移能力增強。研究提示LAMP3的表達可能和JEG-3細胞的侵襲遷移能力呈正相關。
　　其次，通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和慢病毒轉(zhuǎn)染技術分

5、別構(gòu)建過表達和敲減LAMP3的JEG-3細胞，并通過體外侵襲遷移實驗如Transwell、劃痕實驗等檢測不同細胞的侵襲遷移能力、并在過表達LAMP3后檢測細胞對化療藥物的敏感性，另外通過RT-PCR和免疫印跡法檢測不同細胞的EMT相關基因的表達情況。結(jié)果顯示，過表達LAMP3可以通過在絨癌細胞JEG-3中介導EMT的激活促進其侵襲、遷移、耐藥等表型;而對LAMP3敲減后，則會誘導相反的MET過程，使JEG-3細胞的侵襲遷移表型減弱。研究

6、結(jié)果表明，LAMP3可以通過誘導EMT促進絨癌細胞JEG-3的侵襲遷移。
　　最后，通過免疫印跡法分別對過表達和敲減LAMP3后以及分別應用小分子抑制劑XAV939和重組人Wnt-3a蛋白后的JEG-3細胞進行β-catenin和Wnt通路的相關靶基因蛋白表達的測定。結(jié)果表明，LAMP3的表達通過影響JEG-3細胞中Wnt/β-catenin通路的激活參與了對EMT的調(diào)控，這種調(diào)控作用可能是通過對EMT轉(zhuǎn)錄因子Twist和Snai