miR-1246在EGFL7介導的BGC823侵襲遷移中的作用及其機制研究.pdf

1、中圖分類號墅魚UDC610碩士學位論文學校代碼!Q5三三密級公玨miR一1246在EGFL7介導的BGC823侵襲遷移中的作用及其機制研究ThestudyofthemechanismandroleofmiR1246inEGFL7mediatedinvasionandmigrationofBGC823作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：副指導教師：肖妮基礎醫(yī)學病理學與病理生理學基礎醫(yī)學院劉保安教授王寬松副教授論文答辯日

2、期型生墊：塑答辯委員會主席中南大學二0一四年五月miR1246在EGFL7介導的BGC823侵襲遷移中的作用及其機制研究摘要：背景與目的：侵襲轉移是導致胃癌患者死亡的主要原因，有關其分子機制的研究一直以來是胃癌研究領域的熱點。EGFL7是一種分泌型促血管生成因子，在許多腫瘤中都可發(fā)現(xiàn)其高表達。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)降低胃癌細胞BGC823中的EGFL7基因表達后，細胞的侵襲遷移能力下降，并伴有miR1246的表達上調，但具體效應機制不清。

3、miR1246是一新發(fā)現(xiàn)的miRNA，目前有關它的研究較少，關于它在胃癌中作用的研究尚未見報道。本研究旨在探討miR一1246對胃癌細胞生物學行為的影響，并通過靶基因預測網(wǎng)站預測、雙熒光素酶報告基因實驗驗證等方法，探討、驗證miR一1246的效應分子，以此來說明EGFL7基因低表達后BGC823細胞侵襲遷移能力的下降可能與miR1246及其預測靶基因有關，為研究miR一1246在胃癌中的作用提供了新思路，也為研究EGFL7在胃癌中作用機

4、制及其后續(xù)的分子靶向治療提供新視角。方法：(1)用RealtimePCR驗證BGC823、BGC823NC(陰性對照組BGC823穩(wěn)定細胞系)、BGC823E(EGFL7低表達的BGC823穩(wěn)定細胞系)三組細胞中miR1246表達情況；(2)Westemblotting和RealtimePCR檢測BGC823、BGC823NC、BGC823E三組細胞中Ncadherin表達情況；(3)轉染miR1246mimics后胃癌細胞BGC823

5、的侵襲遷移能力變化及其預測靶基因Ncadherin的蛋白和mRNA表達情況；(4)轉染miR1246inhibitor后胃癌細胞BGC823E的侵襲遷移能力變化及其預測靶基因Ncadherin的蛋白和mRNA表達情況；(5)將含有與miRNA1246結合位點的Ncadherin3UTR(野生型)及突變位點(突變型)構建至雙熒光素酶報告質粒中，與miR1246mimics及NegativeControl共轉染至293T細胞中，檢測雙熒光素