miR-200a在膠質(zhì)瘤細胞遷移侵襲中的作用及其機制研究.pdf

1、目的:研究miR-200a在膠質(zhì)瘤細胞遷移侵襲中的作用及其機制。
　　方法:結(jié)合本課題組前期的研究結(jié)果,利用real-timePCR檢測miR-200a在膠質(zhì)瘤細胞系和組織中的表達;將miR-200a的模擬物及抑制劑轉(zhuǎn)染U87細胞后,進行細胞增殖實驗、細胞劃痕實驗、Transwell遷移和侵襲實驗,分別檢測miR-200a對膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲能力的影響。利用在線miRNA靶基因預(yù)測軟件預(yù)測miR-200a的靶基因,并用D

2、AVID在線基因功能軟件進行歸類分析;利用Westernblot實驗和熒光素酶報告系統(tǒng)對所預(yù)測的潛在靶基因進行實驗驗證。
　　結(jié)果:Real-timePCR結(jié)果提示,相對于低級別膠質(zhì)瘤組織和細胞,miR-200a在高級別膠質(zhì)瘤組織和細胞中顯著高表達,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),這與本課題組前期的人膠質(zhì)瘤細胞miRNA芯片結(jié)果一致。過表達miR-200a可促進U87細胞的遷移侵襲能力(P<0.05),而抑制miR-200a的表

3、達則結(jié)果相反。過表達或抑制miR-200a對U87細胞增殖能力均無顯著影響,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。利用DAVID系統(tǒng)分析Targetscan5.0預(yù)測的miR-200a潛在靶基因在KEGG數(shù)據(jù)庫中相關(guān)通路的分布情況,發(fā)現(xiàn)所預(yù)測的miR-200a潛在靶基因大都涉及到Tightjunction、mTOR等多條與腫瘤遷移侵襲相關(guān)的通路。結(jié)合前期研究及相關(guān)文獻,其中值得關(guān)注的抑癌基因有:PTEN、NCAM1、MAP2K4、UBAP1

4、等。
　　Westernblot實驗結(jié)果提示,在U87細胞中過表達miR-200a可下調(diào)PTEN和NCAM1蛋白的表達水平,抑制miR-200a的表達則結(jié)果相反。進一步研究發(fā)現(xiàn),在U87細胞中上調(diào)miR-200a的表達后,AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵分子p-AKT的蛋白表達升高;抑制miR-200a的表達后,p-AKT蛋白表達降低。PTEN是AKT信號傳導(dǎo)通路的重要負性調(diào)控分子,說明miR-200a正性調(diào)控AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能是通過調(diào)