IL-6-STAT3-SNAIL信號通路介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在肝癌射頻消融后復(fù)發(fā)中的作用機制研究.pdf

1、研究背景和研究目的:
　　肝癌在中國的發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第三位，死亡率位居第二位。對于直徑小于5cm的肝癌，影像引導(dǎo)下的射頻消融治療(Radiofrequency ablation，RFA)后的1年、3年、5年生存率與肝癌切除術(shù)無顯著差異，已成為和外科手術(shù)切除相媲美的肝癌治療手段。
　　在臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)部分肝癌病人接受射頻消融治療后，在短期內(nèi)復(fù)發(fā)并進展迅速，這可能與腫瘤的不完全消融有關(guān)，但具體機制尚不明確。上皮

2、間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)在腫瘤的（包括肝癌）發(fā)生發(fā)展中扮演著至關(guān)重要的角色。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化可促進腫瘤細胞增殖、遷徙、轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致腫瘤的進展。
　　根據(jù)上述背景，本課題組應(yīng)用小鼠的肝癌細胞系H22體外培養(yǎng)并模擬相對低溫的不完全消融，建立小鼠同種原位移植肝癌模型并進行不完全性射頻消融，從細胞和動物水平探討不完全消融后腫瘤的復(fù)發(fā)和進展的可能機制。
　　研究方法:

3、　　1.小鼠肝癌細胞系H22體外模擬不完全消融
　　1.1將對數(shù)生長期的H22細胞系沉浸于45℃水浴鍋中加熱5min，分別應(yīng)用RT-PCR及Western Blot檢測處理前后E-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA及蛋白的表達水平變化，以及磷酸化STAT3的表達變化;同時應(yīng)用Elisa法檢測處理前后培養(yǎng)上清中IL-6的表達水平變化。
　　1.2應(yīng)用Western Blot檢測加入外源性IL-6前后及加入

4、外源性IL-6并聯(lián)合體外模擬不完全消融前后，E-cadherin、Vimentin、Snail、磷酸化STAT3蛋白的表達水平變化。
　　1.3應(yīng)用Western Blot檢測加入外源性AG490前后及加入外源性AG490并聯(lián)合體外模擬不完全消融前后，E-cadherin、Vimentin、Snail、磷酸化STAT3蛋白的表達水平變化。
　　2.建立小鼠同種原位肝癌移植模型及不完全熱消融模型
　　1×106個H22細

5、胞皮下注射Balb/c雄性小鼠右下肢，皮下瘤長成后，切成直徑約1mm3的瘤塊種植到小鼠肝臟，共建模10只。1周后開腹直視觀察記錄原位移植肝癌生長情況，隨機選取5只小鼠進行45℃，RFA消融5min處理，作為實驗組，剩余5只作為對照組。術(shù)后觀察小鼠生存情況，1周后處死解剖。應(yīng)用Western blot、免疫組化分別檢測復(fù)發(fā)腫瘤與原位移植肝癌E-cadherin、Vimentin、Snail、磷酸化STAT3蛋白的表達水平變化。
　　

6、研究結(jié)果:
　　1.對小鼠肝癌細胞系H22進行體外模擬不完全消融后，與消融前相比，上皮標(biāo)志物E-cadherin表達下降，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達升高，同時轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail和磷酸化STAT3蛋白表達升高。體外模擬不完全消融的細胞培養(yǎng)上清中，Elisa測得1L-6表達量較消融前升高。
　　2.加入外源性IL-6處理H22細胞系后，與處理前相比，上皮標(biāo)志物E-cadherin表達下降，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達升

7、高，Snail和磷酸化STAT3蛋白表達量升高。且聯(lián)合體外模擬不完全消融后，與不完全消融前相比，各指標(biāo)之間仍呈上述變化且差異更加顯著。
　　3.外源性加入AG490處理H22細胞系后，與處理前相比，上皮標(biāo)志物E-cadherin、問質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、Snail和磷酸化STAT3蛋白表達無明顯差異;AG490處理并進行不完全消融前后與單純不完全消融前后相比，上皮標(biāo)志物E-cadherin表達降低程度小于后者，同時間質(zhì)標(biāo)志物V

8、imentin、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail和磷酸化STAT3蛋白表達升高程度小于后者。
　　4.本次研究共建立10只小鼠同種原位移植肝癌模型，建模成功率100％。實驗組消融術(shù)后1周，5只小鼠均可見明顯大量腹水體征，同時解剖可見在射頻瘤灶邊緣腫瘤復(fù)發(fā)、進展。同時，與對照組相比，E-cadherin表達下降，Vimentin、Snail以及磷酸化STAT3表達升高。
　　結(jié)論及意義:
　　不完全消融可導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和進展，其機