Smad4介導的丙戊酸鈉(VPA)抑制腎細胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的機制研究.pdf

1、目的:
　　腎細胞癌在全世界是非常常見的腎惡性腫瘤之一，在人腫瘤中占2-3％，透明細胞癌是最常見的類型。盡管當前醫(yī)學診療技術(shù)的快速提高，特別是影像學診斷鑒別技術(shù)的高速發(fā)展，腎腫瘤患者的預后仍然不良。相比較非轉(zhuǎn)移腎腫瘤患者的腫瘤特異性存活率(70％)，轉(zhuǎn)移性腎腫瘤患者5年腫瘤特異性存活率僅為27.1％，而且腎透明細胞癌傾向于轉(zhuǎn)移。令人遺憾的是，腎腫瘤的轉(zhuǎn)移的機制和對治療抵抗性，我們現(xiàn)在仍然沒有完全清楚，這里仍然需要更多研究和關(guān)注。上

2、皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，是組織中表皮細胞向間皮細胞轉(zhuǎn)換的病理生理過程，在腫瘤向鄰近和遠處組織器官侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著非常重要的作用。發(fā)生EMT過程中，表皮細胞失去它的細胞極性，以及細胞和細胞之間的緊密連接，進而獲得間皮細胞的特征，使腫瘤細胞具有較強的侵襲轉(zhuǎn)移能力，轉(zhuǎn)移播散至遠處的臟器器官。這個現(xiàn)象過程由腫瘤微環(huán)境中的多個復合體和生長因子所引起，TGF-β就是這樣一個在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中具有促進和抑制雙重作用的因子。已有研究關(guān)注TGF-β在

3、腫瘤發(fā)生EMT的不同階段發(fā)揮著的重要作用，但其在EMT初始反應過程的作用仍存在未明確之處。Smad4被認為是TGF-β通路和BMP信號通路的關(guān)鍵中間傳導蛋白，研究顯示Smad4蛋白的缺失使TGF-β經(jīng)典的信號通路失去功能，而TGF-β從早期的腫瘤抑制作用到晚期的腫瘤促進作用。通過TGF-β信號通路的經(jīng)典和非經(jīng)典的途徑，TGF-β因子發(fā)揮著潛在的誘導形成EMT的作用，Smad4蛋白可以作為腎腫瘤患者預后的獨立因子。組蛋白乙酰化和去乙?；?/p>

4、組蛋白表觀學修飾一種，調(diào)控基因表達的一種機制。組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶和去乙?；赴l(fā)揮重要作用，伴隨著組蛋白的乙?；腿ヒ阴；瑥亩绊懼[瘤基因表達的沉默和激活。VPA屬于Ⅰ類HDAC類抑制劑，數(shù)十年來作為經(jīng)典的抗癲癇藥物用于臨床，研究發(fā)現(xiàn)VPA還具有多種的抗腫瘤潛能，具有抑制腫瘤細胞的增殖，生長和分化，以及腎癌細胞的周期，凋亡。根據(jù)目前的研究，VPA具有調(diào)控Smad4的表達和抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的能力，鑒于Smad4在EMT過程中的重要作用

5、，我們認為VPA可能通過調(diào)節(jié)Smad4蛋白，進而抑制EMT過程，達到抑制腎腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。
　　方法:
　　腎癌細胞系給以不同濃度、不同作用時間的VPA刺激，利用實時定量PCR技術(shù)和免疫蛋白印跡技術(shù)驗證VPA作用后Smad4和EMT相關(guān)指標的改變。以過表達Smad4質(zhì)粒和小干擾RNA轉(zhuǎn)染腎腫瘤細胞786-0，通過免疫蛋白印記技術(shù)實驗檢測在上調(diào)或下調(diào)Smad4水平后，786-0細胞EMT相關(guān)蛋白指標的改變。利用免疫組