姜黃素對(duì)紫杉醇耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3-Taxol-25的逆轉(zhuǎn)增效作用及其機(jī)理的研究.pdf

1、卵巢癌是婦科惡性腫瘤中最常見(jiàn)的類型，在全球范圍內(nèi)，卵巢癌在癌癥導(dǎo)致女性死亡的病例中占第15位。每年超過(guò)二十多萬(wàn)的新增病例，其病程發(fā)展迅速，死亡率高。由于卵巢癌早期缺乏典型的臨床癥狀、缺乏腫瘤標(biāo)志物等有效的篩查手段等原因，約有70％的卵巢癌診斷時(shí)已是晚期。卵巢癌的治療多數(shù)依賴手術(shù)基礎(chǔ)上的化學(xué)治療，但隨著化療療程的增加，多數(shù)患者最終出現(xiàn)多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)，是卵巢癌治療的難點(diǎn)之一。因此尋找有效的逆轉(zhuǎn)

2、卵巢癌耐藥的藥物是目前研究的熱點(diǎn)之一。
　　姜黃素(Curcumin, CCM)是從姜科植物的根莖所提取，其有效成分為一種植物多酚，具有多種生物學(xué)功能。姜黃素具有廣譜的抗腫瘤活性，是潛在的天然抗癌藥物。姜黃素可以通過(guò)介導(dǎo)癌細(xì)胞的不同信號(hào)通路從而達(dá)到抑制腫瘤的作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)姜黃素同時(shí)也具有逆轉(zhuǎn)MDR的作用，主要機(jī)制為逆轉(zhuǎn)相關(guān)蛋白及逆轉(zhuǎn)凋亡基因，但其逆轉(zhuǎn)紫杉醇（paclitaxel，PTX）耐藥、對(duì) PTX的增效作用及其機(jī)

3、理目前尚不明確。
　　目的：
　　本研究以卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及SKOV3/Taxol-25為研究對(duì)象開(kāi)展，探討姜黃素對(duì)該細(xì)胞增殖性的影響，同時(shí)研究姜黃素對(duì)紫杉醇耐藥的增敏作用。通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)姜黃素對(duì)SKOV3及SKOV3/Taxol-25細(xì)胞凋亡的影響，并通過(guò)檢測(cè)miRNA-9、P-gp及p38MAPK的表達(dá)水平，進(jìn)一步探討姜黃素抗卵巢癌的作用及尋找逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的相關(guān)信號(hào)通路，為中藥化療劑及其增敏劑的臨床應(yīng)用提供理論

4、依據(jù)。
　　方法：
　　1） MTT進(jìn)行細(xì)胞存活率檢測(cè)，設(shè)立1個(gè)對(duì)照組，7個(gè)實(shí)驗(yàn)組，使用濃度為10μM、20μM、30μM、40μM、50μM、60μM、70μM的姜黃素分別處理細(xì)胞，探討姜黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及SKOV3/Taxol-25存活率的影響。
　　2） MTT法檢測(cè)姜黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞株 SKOV3及其紫杉醇耐藥株 SKOV3/Taxol-25細(xì)胞的增敏作用，共設(shè)立10個(gè)不同濃度的紫杉醇分別與姜黃素共

5、同處理細(xì)胞，觀察姜黃素對(duì)耐藥卵巢癌細(xì)胞的增敏作用。
　　3）采用流式細(xì)胞儀分析，對(duì)姜黃素單獨(dú)及與紫杉醇(PTX)聯(lián)合處理細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，探討姜黃素抗腫瘤及增敏作用可能的途徑。
　　4）采用Real-time PCR法檢測(cè)P-gp、p38MAPK及miRNA-9的表達(dá)量變化，研究姜黃素單獨(dú)及與紫杉醇(PTX)聯(lián)合作用對(duì)卵巢癌細(xì)胞 SKOV3/Taxol-25中 P-gp、p38MAPK基因表達(dá)及miRNA-9水平的變

6、化。
　　5）運(yùn)用 Western-blot方法，檢測(cè)姜黃素單獨(dú)及聯(lián)合紫杉醇(PTX)處理的SKOV3/Taxol-25細(xì)胞中P-gp、p38MAPK蛋白表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1、不同濃度姜黃素作用人卵巢癌細(xì)胞SKOV3及其紫杉醇耐藥株SKOV3/Taxol-25不同時(shí)間，結(jié)果顯示姜黃素可以抑制這兩株細(xì)胞的生長(zhǎng)，其抑制作用隨藥物濃度和作用時(shí)間的增加而增強(qiáng)，其IC50分別是SKOV324h為42.62uM；SK

7、OV3/Taxol-2524h為41.69uM；SKOV348h為37.36uM；SKOV3/Taxol-2548h為37.59uM。
　　2、不同濃度紫杉醇單獨(dú)或者聯(lián)合低毒劑量的姜黃素(50 uM)作用這兩株細(xì)胞系，其IC50分別為：SKOV3+PTX為5.584ng/ml；SKOV3+PTX+CCM為1.28ng/ml；SKOV3/Taxol+PTX為46.78ng/ml；SKOV3/Taxol+PTX+CCM為8.794ng

8、/ml。結(jié)果表明，當(dāng)紫杉醇與姜黃素聯(lián)合使用時(shí)，無(wú)論是敏感株還是耐藥株的IC50較紫杉醇單獨(dú)使用時(shí)明顯下降，說(shuō)明姜黃素能增強(qiáng)PTX對(duì)卵巢癌細(xì)胞的敏感性。
　　3、通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，姜黃素單獨(dú)使用或姜黃素與紫杉醇聯(lián)合使用均能誘導(dǎo)增加SKOV3/Taxol-25的細(xì)胞凋亡，且兩者聯(lián)合使用時(shí)誘導(dǎo)效果更加明顯，表明姜黃素可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與PTX有協(xié)同作用
　　4、10 ng/ml PTX、50 n

9、g/ml CCM單獨(dú)及聯(lián)合用藥作用SKOV3/Taxol-25細(xì)胞48h后，經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)，結(jié)果表明，姜黃素可以使 SKOV3/Taxol-25細(xì)胞中的P-gp表達(dá)下調(diào)，而p38MAPK及miRNA-9的表達(dá)均上調(diào)。
　　5、10ng/ml PTX、50ng/ml CCM單獨(dú)及聯(lián)合用藥作用SKOV3/Taxol-25細(xì)胞48h后，P-gp及p38MAPK蛋白的表達(dá)情況的Western-blot結(jié)果顯示，CCM單獨(dú)及與PTX聯(lián)

10、合用藥可明顯降低P-gp在蛋白水平的表達(dá)，而同時(shí)增加p38MAPK在蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、姜黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3及SKOV3/Taxol-25具有明顯的抑制作用，其抑制作用具有劑量和時(shí)間依賴性。
　　2、姜黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3及紫杉醇耐藥的卵巢癌細(xì)胞SKOV3/Taxol-25均具有不同程度的增敏作用，對(duì)耐藥株的增敏作用尤其明顯。
　　3、姜黃素具有誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞SKOV3及SKOV3