納米金對(duì)膠質(zhì)瘤放射增敏作用的研究.pdf

1、目的：
　　金作為高原子序數(shù)的金屬材料其原子具有較高的電子密度，在組織內(nèi)可以增加射線與組織的反應(yīng)截面，增加次級(jí)電子的產(chǎn)生；并且金具有較高的光電吸收特性。因此從理論上金可以作為一種放療增敏劑，提高電離輻射對(duì)腫瘤組織的殺傷作用，提高腫瘤放射治療的療效。納米金是一種易于制備、穩(wěn)定性好、毒性低的納米材料，作為一種新型放射增敏劑在腫瘤放射治療方面展示出很大的應(yīng)用前景。本課題通過(guò)制備兩種類型的納米金，從細(xì)胞克隆形成率、DNA損傷、細(xì)胞凋亡三個(gè)

2、方面在細(xì)胞水平上探討納米金對(duì)人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（U87）細(xì)胞株的放射增敏作用；同時(shí)，建立人腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型，在活體動(dòng)物水平上驗(yàn)證納米金對(duì)腫瘤組織的放射增敏治療作用。最終為納米金作為放療增敏劑在臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　通過(guò)化學(xué)還原法分別制備兩種尺寸大小的納米金，經(jīng)BSA吸附、高分子脂質(zhì)囊泡包裹后得到BSA-AuNPs和Au-PLVs；利用粒度分析儀、紫外可見近紅外分光光度計(jì)、透射電子顯微鏡對(duì)制備的納米金

3、進(jìn)行表征；采用MTT實(shí)驗(yàn)篩選出兩種納米金的安全工作濃度；應(yīng)用透射電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)觀察納米金進(jìn)入U(xiǎn)87細(xì)胞的情況；采用克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)照射后對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在X射線照射后細(xì)胞的克隆存活率；通過(guò)免疫熒光標(biāo)記技術(shù)評(píng)價(jià)電離輻射后不同時(shí)間點(diǎn)（0.5 h、2 h、4 h）U87細(xì)胞DNA的損傷程度；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)照射后0 h和48 h細(xì)胞的凋亡率；利用電感耦合等離子體高分辨質(zhì)譜儀分別檢測(cè)尾靜脈注射2 h、24 h后納米金在血液和

4、組織中的含量；建立裸鼠膠質(zhì)瘤模型，尾靜脈注射納米金后進(jìn)行放射治療，通過(guò)治療期間測(cè)量腫瘤組織體積的大小變化情況，以及在治療結(jié)束后剝離腫瘤稱重綜合評(píng)價(jià)治療效果；最后依據(jù)病理學(xué)檢查結(jié)合治療期間裸鼠體重變化情況評(píng)價(jià)納米金對(duì)主要組織器官的毒性影響。
　　結(jié)果：
　　1.制備出~28 nm的BSA-AuNPs；~90 nm的Au-PLVs的納米金。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　（1）MTT試驗(yàn)篩選出BSA-AuNPs的安全工

5、作濃度為36μg/mL，Au-PLVs的安全工作濃度為194μg/mL。
　?。?）透射電子顯微鏡顯示BSA-AuNPs與U87細(xì)胞共同孵育6 h后在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有聚集。激光共聚焦顯微鏡見到Au-PLVs與U87細(xì)胞共同孵育45 min后，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有納米金的分布。
　?。?）克隆形成試驗(yàn)顯示納米金可降低X射線照射后U87細(xì)胞的克隆存活率。
　?。?）免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)納米金可以增加X(jué)射線照射后0.5 h和2 h的U87細(xì)

6、胞DNA損傷程度。
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示納米金可以增加X(jué)射線照射后48 h的U87細(xì)胞的凋亡率。
　　3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　?。?）電感耦合等離子體高分辨質(zhì)譜儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)BSA-AuNPs在裸鼠體內(nèi)半衰期為t1/2=0.328 h，Au-PLVs的半衰期為t1/2=0.245 h；尾靜脈注射2 h、24 h后納米金主要被肝臟和脾臟攝取，腫瘤組織中也有部分納米金的聚集。
　?。?）荷瘤裸鼠的治療結(jié)果發(fā)

7、現(xiàn)納米金聯(lián)合放射治療可以有效地抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，病理結(jié)果顯示腫瘤組織內(nèi)出現(xiàn)明顯的細(xì)胞壞死。
　?。?）主要器官的病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)納米金對(duì)各器官的毒性作用，同時(shí)治療期間裸鼠的體重變化沒(méi)有出現(xiàn)差異。
　　結(jié)論：
　　本課題研究在體外細(xì)胞水平和在體動(dòng)物水平上都證明了納米金具有放射增敏作用，由于它較強(qiáng)的光電吸收特性和可以增加次級(jí)電子的產(chǎn)生，使得納米金可以提高射線對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，最終達(dá)到治療腫瘤的目的。同時(shí)細(xì)胞水平和動(dòng)物