蟲草素對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，即使實(shí)施根治性手術(shù)，五年生存率仍不理想。術(shù)后的高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率是影響生存時(shí)間的主要原因?；熢谖赴┲委熤邪l(fā)揮著舉足輕重的作用，但由于腫瘤細(xì)胞對(duì)傳統(tǒng)化療藥物的耐藥性，使得傳統(tǒng)化療藥物治療胃癌的效果不理想。目前，中醫(yī)藥用于惡性腫瘤的治療受到越來越多的關(guān)注。蟲草素是蟲草中核苷類主要活性成分，同時(shí)也是蟲草的主要活性成分，其具有多種生物活性，如抗腫瘤、抑菌、抑制病毒等作用。研究證明蟲草素能抑制mRNA合成，誘導(dǎo)細(xì)胞

2、凋亡，使細(xì)胞分化，從而對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用。本課題以胃癌細(xì)胞株BGC823及MGC-803為研究對(duì)象，探討蟲草素對(duì)人胃癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)及抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制，為蟲草素臨床治療胃癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法不同濃度蟲草素作用于胃癌細(xì)胞不同時(shí)間后，用MTT法檢測(cè)蟲草素對(duì)于胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用；運(yùn)用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度蟲草素影響胃癌細(xì)胞的克隆形成能力；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期細(xì)胞，Western blot法檢

3、測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)；用AnnexinV-FITC/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，再運(yùn)用熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；Western blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果蟲草素對(duì)于胃癌細(xì)胞有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，呈明顯的時(shí)間和濃度效應(yīng)關(guān)系（P<0.05）。蟲草素呈劑量依賴性的誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株阻滯于S期；Western blot法檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)提示cyclin A和 cyclin B1的表達(dá)下調(diào)，c

4、yclin D1的表達(dá)上調(diào)，提示蟲草素通過誘導(dǎo)這些細(xì)胞阻滯于S期。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率及晚期凋亡率與對(duì)照組相比較具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，且隨著藥物濃度的提高,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用越明顯。運(yùn)用熒光顯微鏡下觀察蟲草素處理的胃癌細(xì)胞顯示細(xì)胞體積變小，染色質(zhì)濃縮并聚集于核膜下呈境界分明的顆粒狀塊或月牙形。Western blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)Bcl-2, NF-κB蛋白表達(dá)減少，而Caspase-3、Caspase-9