5-HT4與5-HT7受體在慢傳輸型便秘患者乙狀結(jié)腸中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　依據(jù)慢傳輸型便秘(Slow transit constipation, STC)患者的臨床癥狀、影像學(xué)檢查及手術(shù)中驗證所見可分為結(jié)腸痙攣的STC患者和結(jié)腸非痙攣的STC患者。本實驗通過利用腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system, ENS)特異性標志物5-HT4與5-HT7來對STC患者乙狀結(jié)腸腸壁組織進行免疫組織化學(xué)染色檢查，與正常對照組對比，查看STC患者腸壁組織的異常改變，探討便秘的產(chǎn)生機制，為S

2、TC患者的治療尋找新的藥物靶點。
　　方法：
　　1標本采集
　　1.1標本的選擇：
　　術(shù)前通過2次結(jié)腸傳輸試驗，每次72小時，證明結(jié)腸傳輸緩慢，結(jié)腸內(nèi)殘留標記物超過總標記物的20％，排除結(jié)腸的器質(zhì)性病變及別的全身疾病，診斷標準切合羅馬III關(guān)于STC的描寫。匯集經(jīng)鋇灌腸和手術(shù)證實都有結(jié)腸痙攣的STC患者10例，取其乙狀結(jié)腸痙攣段腸壁組織作為STC痙攣組標本；匯集鋇灌腸和手術(shù)時都未證實有結(jié)腸痙攣的STC患者10

3、例，取其乙狀結(jié)腸腸壁組織作為STC非痙攣組標本；匯集以往既無乙狀結(jié)腸器質(zhì)性病變，又無慢性便秘病史及其它全身系統(tǒng)系疾病的直腸癌或降結(jié)腸癌患者乙狀結(jié)腸段10例作為正常參照組，其標本取自距腫瘤邊沿5cm以上的正常腸壁組織。
　　1.2標本采集方法：
　　術(shù)中切除局部腸管標本后切取其全層腸壁組織，大小為2cm×2cm，務(wù)必除去鉗夾部位的腸壁組織，STC痙攣組切取乙狀結(jié)腸痙攣段的腸壁組織作為標本，STC非痙攣組切取乙狀結(jié)腸某一部分腸壁

4、組織作為標本，正常參照組切取距腫瘤邊沿5cm以上的正常乙狀結(jié)腸腸壁組織作為標本。
　　1.3標本處理：
　　組織標本切取后，利用PBS緩沖液沖刷后放入4%多聚甲醛溶液中固定，待24h取出后開始修剪標本，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋制成石蠟標本。
　　2染色鏡檢
　　2.1石蠟標本切片制備：
　　使用切片機切片，溫水漂浮法展片，撈片，烤干備用。
　　2.2染色：
　　切片經(jīng)脫蠟、水化、抗

5、原修復(fù)、3%甲醇雙氧水孵育、血清封閉后滴加一抗(5-HT4、5-HT7)及二抗，爾后經(jīng)DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度乙醇脫水等過程，最后封片。
　　2.3鏡檢：
　　在生物顯微鏡下，察看5-HT4與5-HT7在乙狀結(jié)腸粘膜層和肌層的染色，應(yīng)用計算機圖像分析系統(tǒng)進行定量分析，使用Image-Pro Plus6.0專業(yè)圖像分析軟件進行定量分析。每張切片隨機選取3個待測視野，測定陽性區(qū)域面積和陽性比率，計算光密度值，計算每個視野的陽

6、性染色指數(shù)(陽性比率×光密度值×l00)，最后計算平均值。
　　2.4采圖：
　　應(yīng)用吸管器材選擇陽性區(qū)域，選取確定后將目標顏色文件保存，同一批次圖片采納相同的目標顏色文件進行處理。
　　3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析：
　　使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS20.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料采用均數(shù)±標準差(-x±s)或中位數(shù)(P25,P75)表示，各組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗或秩和檢驗，P<0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：<

7、br>　　15-HT4受體免疫組化染色：
　　正常對照組乙狀結(jié)腸中5-HT4受體陽性染色在結(jié)腸黏膜層、肌層，尤其是肌間神經(jīng)叢均有散布，在肌細胞上有少量表達。在黏膜層，陽性染色主要散布于局部腔面杯狀細胞膜和吸收性上皮細胞。
　　1.1痙攣組與非痙攣組比較：
　　5-HT4受體在痙攣組STC病人的乙狀結(jié)腸黏膜層的表達無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，5-HT4受體在痙攣組STC病人的乙狀結(jié)腸肌間神經(jīng)叢的表達降低，有明顯統(tǒng)計

8、學(xué)意義(P<0.05)。
　　1.2實驗組與正常對照組比較：
　　無論黏膜層還是肌間神經(jīng)叢5-HT4受體在痙攣和非痙攣兩組STC病人的乙狀結(jié)腸表達都降低(P<0.05)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　25-HT7受體免疫組化染色：
　　正常對照組乙狀結(jié)腸中5-HT7受體陽性染色在黏膜層和肌層均有散布，其中以肌間神經(jīng)叢為主。
　　2.1非痙攣組與正常對照組比較：
　　無論黏膜層還是肌層5-HT7受體在非痙攣組

9、STC病人的乙狀結(jié)腸表達都增高(P<0.05)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.2痙攣組與正常對照組比較：
　　無論黏膜層還是肌層5-HT7受體在痙攣組STC病人的乙狀結(jié)腸表達無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.3非痙攣組與痙攣組作比較：
　　無論黏膜層還是肌層5-HT7受體在非痙攣組STC病人的乙狀結(jié)腸表達都增高(P<0.05)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1乙狀結(jié)腸痙攣和非痙攣的STC

10、患者的黏膜層和肌間神經(jīng)叢中的5-HT4受體的表達均較正常對照組降低，推測5-HT4受體激動劑可以改善結(jié)腸動力。
　　2與乙狀結(jié)腸非痙攣的STC患者相比,5-HT4受體在乙狀結(jié)腸痙攣的STC患者的腸黏膜層表達無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，而在肌間神經(jīng)叢表達顯著降低。這可能是由于痙攣的乙狀結(jié)腸其結(jié)腸肌間神經(jīng)叢病變導(dǎo)致的。
　　35-HT4受體在乙狀結(jié)腸痙攣患者中表達的下降可能參與了單純結(jié)腸痙攣發(fā)生的病理生理基礎(chǔ)。
　　4乙狀結(jié)腸非痙攣