西北地區(qū)甲狀腺功能減低癥患者DUOX2基因突變篩查和研究.pdf

1、先天性甲狀腺功能減低癥(congenital hypothyroidism，CH)是一種常見的由于甲狀腺發(fā)育不全或者甲狀腺內(nèi)分泌機能障礙而引起的內(nèi)分泌疾病。研究發(fā)現(xiàn)由于甲狀腺激素分泌不足導(dǎo)致的CH多數(shù)是遺傳因素導(dǎo)致的，雙氧化物酶2(DUOX2)基因作為甲狀腺激素合成的關(guān)鍵基因，其突變對CH的形成有著重要的影響。
　　本研究共招募到西北地區(qū)135例CH患者和100例健康個體，采用高通量測序的方法對患者DUOX2全外顯子和外顯子內(nèi)含子

2、剪接處進行測序，同時對篩選出來的候選致病位點進行一代測序驗證，并在100例健康樣本對照中進行頻率驗證。然后利用計算生物學(xué)的方法對這些潛在致病位點的功能和效應(yīng)進行分析，同時分析DUOX2突變譜和CH臨床表型的關(guān)系，并且根據(jù)美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)學(xué)會和美國分子病理學(xué)會(ACMG/AMP)序列變異注釋標準對其進行致病等級的劃分。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn):在135例CH患者中共檢測到49個罕見突變和2個功能多態(tài)性位點。在49個罕見突變中，有35個

3、是錯義突變，6個插入缺失突變，6個無義突變和2個剪接突變，其中11個是首次發(fā)現(xiàn)的新突變，它們在健康對照中的頻率均小于1％。在135例患者中DUOX2突變檢出率為60.7％(82/135)，并且有4個熱點突變(p.R1110Q，p.S1067L，p.R885Q，p.K530X)在CH患者和健康對照組中存在顯著差異。采用SIFT，PolyPhen-2，MutationTaster，F(xiàn)ATHMM，M-CAP等5個蛋白質(zhì)功能預(yù)測軟件對所有錯義和

4、無義突變的分析發(fā)現(xiàn)21個突變可能會損害蛋白質(zhì)的功能;利用MaxEntScan，NetGene2和BDGP3個軟件對剪接突變分析發(fā)現(xiàn)2個突變(IVS28+1G＞T，IVS17+1G＞T)都可能會損害蛋白質(zhì)的功能。研究發(fā)現(xiàn)患者所攜帶DUOX2的突變類型和位點數(shù)與臨床表型沒有直接的關(guān)系，其基因型和臨床表型之間存在非常復(fù)雜的關(guān)系。對新發(fā)現(xiàn)的疑似致病位點進行7個物種間序列保守性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4個(p.D137E，p.R434_S440del，p.

5、F591S，p.M1093V)位于保守區(qū)，可能對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生影響。最后綜合目前已知的所有證據(jù)，根據(jù)ACMG/AMP對疑似致病位點的致病等級的劃分標準，發(fā)現(xiàn)7個突變位點(p.R1110Q，p.R885Q，IVS28+1G＞T，p.R842X，IVS17+1G＞T，p.K530X，p.Q481X)為致病的(pathogenic)、9個可能致病的(likeyly pathogenic)、33個意義不明的(variants of unk

6、nown significance)以及2個(p.S1067L，p.H678R)良性突變位點(benign)。另外，本研究發(fā)現(xiàn)的兩個功能多態(tài)性位點中，p.S1067L與CH的發(fā)生風(fēng)險增高有關(guān)(OR=2.2，P=0)。
　　總之，本研究首次采用高通量測序技術(shù)對西北地區(qū)CH患者的DUOX2基因突變進行篩查研究，分析了西北地區(qū)甲低患者中DUOX2突變的類型、特點、以及與臨床表型的關(guān)系，這對于擴大DUOX2基因突變譜，進一步了解CH致病機