甲狀腺發(fā)育不全的先天性甲狀腺功能減低癥致病基因篩查研究.pdf

1、先天性甲狀腺功能減低癥(CH)是一種常見的小兒內分泌疾病，是引起兒童智力低下的最常見的原因之一。其中，由甲狀腺發(fā)育不全(TD)引起的CH約占總數(shù)的85％。盡管已鑒定出眾多與CH相關的致病基因，但由于這些基因普遍突變率極低，無法解釋眾多CH病例存在的現(xiàn)實。因此，必然存在其他未被發(fā)現(xiàn)與鑒定的CH致病基因。為完善NKX2.5基因突變類型，進一步探索未知CH突變類型而開展本研究。
　　本研究共分為兩部分，第一部分首先在山東省90例伴異位的

2、TD病例中進行NKX2.5突變篩查，以研究山東省伴異位的TD患者NKX2.5基因突變情況和遺傳特征，是國內首次針對NKX2.5基因開展的最大規(guī)模的遺傳篩查。選取山東省90例已排除先天性疾?。ㄌ貏e是先天性心臟?。┑陌楫愇籘D病例提取基因組DNA，對NKX2.5基因進行PCR擴增，測序后進行突變篩查。結果并未發(fā)現(xiàn)NKX2.5基因外顯子區(qū)及外顯子與內含子接頭區(qū)存在突變，但在外顯子區(qū)發(fā)現(xiàn)1個SNP位點(rs2277923，c.63T＞C)為同義

3、突變(Glu→Glu)。經統(tǒng)計，90例伴異位的TD病例中SNP rs2277923的等位基因頻率為T=0.4167，與MAF最小等位基因頻率相比較，基因頻率無顯著性差異(x2=3.4376，P＞0.05)，提示該SNP位點與TD的發(fā)生無相關性，證實伴異位的TD病例中NKX2.5基因突變率極低，不是山東地區(qū)CH病例的致病基因。
　　本研究第二部分采用外顯子組測序技術(WES)對先天性甲狀腺功能減低癥患者進行致病基因篩查研究，選取10

4、例排除已知CH致病基因[NKX2.1(TTF1)，F(xiàn)OXE1(TTF2)，PAX8，NKX2.5，TSHR]突變的伴甲狀腺缺如的TD病例，使用Agilent HumanAll Exon50M Kit芯片進行外顯子捕獲，并在Illumina MiSeq2000高通量測序平臺上進行外顯子組測序，以檢測新的CH致病基因。通過對外顯子組測序結果的分析，初步將致病基因突變限定在10個基因中。對突變檢出樣本進行sanger測序驗證以排除假陽性，所有

5、檢出突變的標本中都發(fā)現(xiàn)了外顯子組測序結果顯示的突變位點。對這10個突變進行文獻查閱和功能預測，結合這些突變與已報道的突變的近緣關系，初步推斷FOXC2可能為CH的致病基因。但在后期的病例篩查（缺如90例，異位100例）中，并未再發(fā)現(xiàn)有該基因的突變類型，推測該基因的突變率也是極低的。通過種內基因組學的比較了解到FOXC2基因與已知CH致病基因FOXE2的近緣性，且本研究通過提取成熟甲狀腺組織的mRNA，通過RT-PCR驗證了FOXC2存在