靈芝菌絲體和子實(shí)體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析.pdf

1、靈芝三萜酸是除多糖外靈芝中最主要的活性成分，具有廣泛的藥理作用。然而，目前市場(chǎng)上三萜酸產(chǎn)品稀少，價(jià)格昂貴，嚴(yán)重阻礙了對(duì)其藥理和應(yīng)用開(kāi)發(fā)的進(jìn)一步研究。因此，對(duì)不同來(lái)源的靈芝材料進(jìn)行三萜酸的提取并對(duì)其組分進(jìn)行分析具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本論文以靈芝子實(shí)體和菌絲體為研究對(duì)象，分別對(duì)其三萜酸的提取技術(shù)進(jìn)行了試驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)三萜酸的組分進(jìn)行了初步分析，并對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，得出以下主要結(jié)果:
　　1.以靈芝子實(shí)體為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)

2、比實(shí)驗(yàn)確定以無(wú)水乙醇為提取溶劑，不經(jīng)酶預(yù)處理的回流提取法作為研究靈芝子實(shí)體中三萜酸高效提取的基礎(chǔ)。進(jìn)一步進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)、Box-Benhnken設(shè)計(jì)以及響應(yīng)面法優(yōu)化。以液料比(A)、提取時(shí)間(B)和提取次數(shù)(C)為提取的關(guān)鍵因素，通過(guò)Box-Benhnken設(shè)計(jì)及響應(yīng)面法優(yōu)化，得到了可預(yù)測(cè)靈芝子實(shí)體三萜酸提取率的回歸模型: Y=0.33+0.003125A+0.021B-0.014C+0.0005AB-0.019AC-0.005BC-0

3、.044A2-0.040B2-0.032C2。經(jīng)分析，得到提取靈芝子實(shí)體中三萜酸的最佳條件為:液料比25∶1，提取時(shí)間2h，提取次數(shù)3次。最優(yōu)條件下的子實(shí)體三萜酸提取率為(0.335±0.008)mg/g，與模型預(yù)測(cè)值相符。
　　2.以靈芝CGMCC5.616菌株為研究對(duì)象，通過(guò)搖瓶發(fā)酵獲得大量菌絲體。確定以無(wú)水乙醇進(jìn)行回流提取的前提下，采用單因素實(shí)驗(yàn)考察液料比、提取時(shí)間和提取次數(shù)等對(duì)靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響，然后通過(guò)中心組合

4、旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，得到了靈芝菌絲體三萜酸提取率對(duì)這三個(gè)因素的多元回歸方程:Y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.021AB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.057C2。確定了最佳提取條件為:液料比12∶1，提取時(shí)間2h，提取次數(shù)3次。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明菌絲體三萜酸提取率為(0.537±0.005))mg/g，與模型預(yù)測(cè)值相符。
　　3.以ADS-8大孔樹(shù)脂為媒介，對(duì)提

5、取的靈芝三萜酸進(jìn)行了初分離?？疾炝讼疵摿魉賹?duì)靈芝菌絲體三萜酸的影響，液相色譜分析顯示，不同流速下洗脫出的三萜酸組成不同，特別是保留時(shí)間為44.66min的色譜峰在含量上差異較大;當(dāng)流速為3mL/min時(shí)，與1mL/min，2mL/min條件下相比，洗出了兩個(gè)新的組分峰(保留時(shí)間分別為66.27min和67.31min)。另外，乙醇濃度對(duì)菌絲體三萜酸的洗脫有顯著影響，70％～90％的乙醇可將三萜酸完全洗脫下來(lái)，60％的乙醇可洗脫下大部分的

6、三萜酸，而40％和20％的乙醇洗脫效果不理想。高效液相色譜進(jìn)一步分析表明，菌絲體和子實(shí)體中三萜酸的組分存在著明顯差異，子實(shí)體中三萜酸成分出峰較晚，且組分相對(duì)較多。
　　4.采用LC-ESI-MS分析靈芝菌絲體中三萜酸成分，結(jié)果顯示，菌絲體中含有少量的靈芝酸A和靈芝酸B。另外，菌絲體中兩個(gè)主要的洗脫峰，一個(gè)為靈芝酸A的類似物，另一個(gè)為Ganolucidic acid B的類似物，但其具體結(jié)構(gòu)還有待進(jìn)一步確定。
　　5.三萜酸對(duì)