IFN-γ對小鼠急性過敏性氣道炎癥的抑制作用.pdf

1、研究背景：
　　過敏性氣道炎癥是過敏性哮喘的病理生理基礎(chǔ)，由對外部刺激不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答引起。長期以來一直認(rèn)為哮喘是由抗原誘導(dǎo) Th2細(xì)胞活化引起的。近期的研究表明2型固有淋巴細(xì)胞(Group2 innate lymphoid cells, ILC2s)在哮喘的發(fā)生過程中發(fā)揮重要的作用。
　　ILC2s廣泛分布于脂肪相關(guān)淋巴集簇和包括皮膚、肝臟、肺、小腸、內(nèi)臟脂肪組織在內(nèi)的非淋巴組織。上皮來源的細(xì)胞因子胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(

2、Thymic stromal lymphopoietin, TSLP)、白細(xì)胞介素-33（Interleukin-33, IL-33）、IL-25均可以活化ILC2s。IL-33是IL-1家族中的一員，IL-33可以與ILC2s表面表達(dá)的ST2-IL-1受體輔助蛋白復(fù)合體結(jié)合，活化ILC2s，并分泌大量Th2型細(xì)胞因子IL-5、IL-13等。IL-5可以促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的聚集、加劇炎癥反應(yīng)；IL-13可以促進(jìn)杯狀細(xì)胞分泌黏液和平滑肌細(xì)胞

3、收縮。
　　初始CD4+T細(xì)胞可以分化為Th1或Th2細(xì)胞，Th1型細(xì)胞因子和Th2型細(xì)胞因子可以交叉調(diào)節(jié)Th2和Th1細(xì)胞的發(fā)育和分化。干擾素-γ(Interferon-γ, IFN-γ)可以由Th1細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌，可以觸發(fā)1型免疫反應(yīng)、抑制2型免疫反應(yīng)。然而IFN-γ對ILC2s功能的影響目前尚不清楚。鑒于ILC2s是Th2細(xì)胞的“鏡像細(xì)胞”，我們猜測IFN-γ對ILC2s可能也存在抑

4、制作用。
　　研究目的：
　　本研究采用經(jīng)鼻滴入IL-33的方法建立小鼠急性過敏性氣道炎癥模型，并用IFN-γ進(jìn)行干預(yù)，觀察IFN-γ對小鼠急性過敏性氣道炎癥的影響，并探究IFN-γ抑制小鼠急性過敏性氣道炎癥中ILC2s的作用機(jī)制及其對IL-5、IL-13產(chǎn)生的影響，為臨床急性過敏性氣道炎癥的治療提供理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　24只雌性C57BL/6（6-8w）小鼠隨機(jī)分為4組，每組6只。IL-33模型組、

5、單獨(dú)IFN-γ組、PBS對照組、IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組。在實(shí)驗(yàn)第0 d和第3 d進(jìn)行滴鼻刺激，第6 d處死小鼠收集支氣管灌洗液（Bronchial alveolar lavage fluid, BALF)和肺組織。肺組織切片進(jìn)行蘇木素-伊紅染色(Hematoxylin and eosin, HE)和過碘酸-雪弗染色(Periodic acid-Schiff reagent, PAS)觀察病理變化。流式細(xì)胞術(shù)對 ILC2s、嗜酸

6、性粒細(xì)胞進(jìn)行分析。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ Enzyme- linked immunosorbent assay, ELISA）檢測肺勻漿和BALF上清中IL-5和IL-13的含量。實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real time polymerase chain reaction, Real-time PCR）檢測IL-5、IL-13和ST2 mRNA表達(dá)量的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.小鼠肺組織切片染色結(jié)果
　?。?）HE結(jié)果

7、顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組細(xì)支氣管及伴行血管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組肺組織中仍有炎性細(xì)胞浸潤，但明顯減輕。
　?。?）PAS結(jié)果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組支氣管黏膜處可見大量杯狀細(xì)胞增生且分泌大量黏液；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組支氣管黏膜雖有杯狀細(xì)胞增生和黏液分泌，但明顯減少。
　　2.小鼠BALF和肺單細(xì)胞

8、懸液中ILC2s和嗜酸性粒細(xì)胞的流式結(jié)果
　　流式結(jié)果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細(xì)胞和ILC2s占總上樣細(xì)胞數(shù)的比例和絕對值均升高（P<0.05）；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細(xì)胞ILC2s占總上樣細(xì)胞數(shù)的比例和絕對值均降低（P<0.05）。
　　3.小鼠BALF與肺勻漿上清中IL-5、IL-13 ELISA結(jié)果
　　E

9、LISA結(jié)果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組小鼠BALF和肺勻漿上清中的IL-5、IL-13含量升高（P<0.05）；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺勻漿上清中IL-5、IL-13含量降低（P<0.05）。
　　4.小鼠肺IL-5、IL-13、ST2Real-time PCR結(jié)果
　　Real-time PCR結(jié)果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組小鼠肺中IL-5、IL-