二氫楊梅素對人乳牙牙髓干細胞活性及成骨分化能力影響的初步探究.pdf

1、目的:
　　本研究擬通過體外分離、培養(yǎng)及鑒定人乳牙牙髓干細胞后，探討二氫楊梅素對人乳牙牙髓干細胞的活性及成骨分化能力的影響，淺探二氫楊梅素與乳牙牙髓干細胞在治療牙周疾病中的可能性。
　　方法:
　　1.采用組織塊法及有限稀釋法獲取人乳牙牙髓干細胞，在倒置顯微鏡下觀察細胞的生長狀況，免疫熒光組織化學及流式細胞儀檢測細胞表面標志物來鑒定細胞來源，CCK-8法繪制細胞生長曲線，并對細胞進行成脂及成骨誘導分化；
　　2.

2、采用CCK-8法、堿性磷酸酶試劑盒及實時熒光定量PCR檢測0.02μM、0.1μM、0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素對人乳牙牙髓干細胞的活性及骨向分化能力的影響。
　　結果:
　　1.鏡下觀察見細胞在第7 d左右從組織塊中爬出，細胞生長狀態(tài)良好；免疫熒光組織化學結果為：第3代SHED波形絲蛋白在胞漿內表達陽性，角蛋白表達陰性；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)細胞 CD146、CD105表達陽性，CD34、CD45表達

3、陰性；第4代 SHED生長曲線呈現(xiàn)“S”型；SHED成脂誘導3周后油紅O染色見細胞中有紅色脂滴形成；SHED成骨誘導4周后茜素紅染色形成紅染的礦化結節(jié)。
　　2.二氫楊梅素對SHED細胞活性的影響
　　CCK-8結果顯示：0.02μM、0.1μM、0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素在第24 h、48 h及72 h時與不含二氫楊梅素對照組相比，增值能力無顯著差異(P>0.05)，說明試驗設置的各濃度的二氫楊

4、梅素對 SHED無明顯的細胞毒性。
　　3.二氫楊梅素對SHED成骨分化能力的影響
　?、哦錀蠲匪貙HED堿性磷酸酶活性的影響
　　10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組與對照組相比，可促進SHED堿性磷酸酶的活性(P<0.05)；而0.02μM、0.1μM、0.5μM及2μM濃度的二氫楊梅素組的ALP活性與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　⑵二氫楊梅素對SHED RUNX2及OCN mRNA表達的

5、影響
　　RUNX2 mRNA表達結果為：0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組RUNX2 mRNA的表達與對照組相比要高(P<0.05);OCN mRNA表達變化為：2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組與對照組相比，OCN mRNA的表達成上調趨勢(P<0.05)。
　　結論:
　　1.組織塊法及有限稀釋法可成功培養(yǎng)出人乳牙牙髓干細胞，人乳牙牙髓干細胞在一定誘導條件下可向成骨及成脂方向分化；