濾泡輔助性T細(xì)胞及其亞型在IgG4相關(guān)性疾病中的研究.pdf

1、目的：研究IgG4相關(guān)性疾?。↖gG4-related disease，IgG4-RD）中濾泡輔助性T（Tfh）細(xì)胞及其亞型的表達(dá)及功能。
　　方法：收集初治IgG4-RD患者的外周血及新鮮受累組織細(xì)胞懸液，同時(shí)收集性別、年齡相匹配的健康人作為對(duì)照，運(yùn)用流式染色技術(shù)研究IgG4-RD患者外周血和組織中Tfh細(xì)胞及其亞型的表達(dá);運(yùn)用RT-PCR技術(shù)比較IgG4-RD患者和健康對(duì)照組中與Tfh表達(dá)密切相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6和Bl

2、imp-1以及與其功能密切相關(guān)的重要細(xì)胞因子IL-21在外周血中轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)的差異;運(yùn)用免疫組化和免疫熒光技術(shù)定位IL-21和(CD4+CXCR5+)Tfh細(xì)胞在IgG4-RD受累組織中的分布;進(jìn)一步通過將IgG4-RD患者的循環(huán)Tfh(cTfh)及其亞型分別與健康正常人的B細(xì)胞共培養(yǎng)，探索Tfh及其亞型在IgG4-RD中對(duì)B細(xì)胞增殖、細(xì)胞損傷、凋亡及分化分泌抗體的影響。
　　結(jié)果：IgG4-RD患者外周血和受累組織中的(CD4

3、+CXCR5+)T、(CD4+CXCR5+ICOS+)T、(CD4+CXCR5+PD-1+)T、(CD4+CXCR5+ICOS+PD-1+)T細(xì)胞群均較正常人比明顯高表達(dá)，且這些細(xì)胞群在組織中的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其在外周血中的表達(dá)，其中，(CD4+CXCR5+ICOS+PD-1+)T以及PD-1在(CD4+CXCR5+ICOS+)T細(xì)胞群中的表達(dá)水平與IgG4-RD患者的血清IgG、IgG4、IgG4/IgG水平及受累器官數(shù)目均呈顯著正相

4、關(guān)性，后者還與高分泌IgG4的漿母細(xì)胞(CD19+CD24-CD38hi)顯著正相關(guān)。決定Tfh細(xì)胞表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6在IgG4-RD外周血CD4+T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平較正常人無差異，而與Tfh功能相關(guān)的重要細(xì)胞因子IL-21的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在IgG4-RD外周血中明顯增高，且與IgG4、IgG、IgG4/IgG的水平呈顯著正相關(guān)性。在IgG4-RD患者受累組織中，(CD4+CXCR5+)Tfh細(xì)胞和IL-21均顯示為高表達(dá)，

5、主要定位于腺體細(xì)胞或異位生發(fā)中心周圍，部分為彌漫分布;較正常人而言，IgG4-RD的cTfh細(xì)胞更能促進(jìn)B細(xì)胞增殖和加重細(xì)胞損傷，并抑制其凋亡，并且能更多地促使na(i)ve B細(xì)胞向(CD19+CD27+IgD-)switched(S)memory B細(xì)胞和(CD19+CD24-CD38hi)B亞群分化，從而產(chǎn)生分泌更多的IgG4抗體。進(jìn)一步通過對(duì)cTfh細(xì)胞亞型的研究，發(fā)現(xiàn)，三種cTfh亞型在IgG4-RD中均具有很強(qiáng)的促進(jìn)B細(xì)胞增

6、殖并向S memory B細(xì)胞分化，而抑制其凋亡的功能，但主為cTfh1和cTfh2而非cTfh17在IgG4-RD中高表達(dá)，cTfh1和cTfh2均能促進(jìn)B細(xì)胞向(CD19+CD24-CD38hi)B細(xì)胞亞群分化并產(chǎn)生分泌更多的IgG4抗體，以cTfh2細(xì)胞的能力更為顯著。
　　結(jié)論：Tfh在IgG4-RD的發(fā)病中起重要作用，（CD4+CXCR5+ICOS+）T細(xì)胞中PD-1的表達(dá)水平在促進(jìn)GC中B細(xì)胞向分泌IgG4為主的漿細(xì)胞

7、分化中起著關(guān)鍵的作用。主因cTfh細(xì)胞分泌的IL-21在IgG4-RD的發(fā)病機(jī)制中可能扮演著重要的角色。此外，IgG4-RD中的Tfh細(xì)胞功能異?；罨?，可顯著促進(jìn)B細(xì)胞的增殖、加重細(xì)胞損傷，抑制其凋亡，促進(jìn)na(i)ve B細(xì)胞向switched(S)memory B細(xì)胞和（CD19+CD24-CD38hi）B細(xì)胞亞群分化。其中，cTfh1和cTfh2細(xì)胞在IgG4-RD中高表達(dá)，具有促進(jìn)IgG4-RD中B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化及分泌IgG4