濾泡輔助性T細胞在慢性HBV感染中的初步研究.pdf

1、背景：
　　HBV(Hepatitis B virus，HBV)的感染是一個波及全球的公共衛(wèi)生問題，是造成肝臟急慢性損傷的主要原因。在我國，隨著疫苗接種等預防措施的普及，HBV感染人群較前已有明顯減少，但是人群的HBsAg陽性率仍達7.18％。許多研究表明，HBV引起肝臟損害的原因主要是病毒所觸發(fā)的機體免疫應答所造成，機體的CD8+T淋巴細胞、樹突狀細胞、調(diào)節(jié)性T淋巴細胞、自然殺傷性細胞等多種免疫細胞都參與疾病其中，交互成為網(wǎng)絡，

2、影響疾病的發(fā)展過程。在這個免疫網(wǎng)絡中，濾泡輔助性T淋巴細胞(T follicular helper cells，Tfh)所發(fā)揮的作用在近年來引起了廣泛的關注。濾泡輔助性T淋巴細胞主要存在于生發(fā)中心（germinal center，GC）中，在外周血循環(huán)系統(tǒng)中也有分布。Tfh細胞的主要作用是輔助B細胞增殖和發(fā)育，形成漿細胞或者是記憶B細胞，并進一步的輔助B細胞完成抗體分泌和型別轉換。研究Tfh細胞在HBV感染后慢性乙型肝炎中發(fā)揮的作用，對

3、于了解抗HBV特異性體液免疫機制具有重要意義。
　　目的：
　　通過檢測慢性HBV感染者外周血中的Tfh細胞的頻數(shù)、相關功能分子和細胞因子的基因的表達情況。初步了解在慢性HBV感染過程中Tfh細胞所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1、研究對象選擇:選擇兩年內(nèi)未進行抗病毒治療的慢性HBV感染的患者，通過患者AST、ALT和HBV-DNA臨床指標的區(qū)別將其分為免疫耐受組和免疫激活組。選擇門診健康體檢者作為健康對照組。<

4、br>　　2、流式細胞術檢測三組人群外周血中的Tfh細胞(CD3+CD4+CXCR5+T)和B細胞(CD19+)頻數(shù)，Tfh表面ICOS、PD1、CD40L分子的表達頻數(shù)和B細胞表面ICOSL、PDL1、CD40分子的表達頻數(shù)。
　　3、熒光定量PCR技術檢測慢性HBV感染者Tfh細胞的特異性功能分子CXCR5、Bcl6和細胞因子IL-4、IL-21的mRNA的表達情況。
　　4、統(tǒng)計分析:數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件進行整

5、理和分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差的形式表示，多組差異比較采用單因素方差分析，兩組比較采用LSD-t檢驗，檢驗水準α=0.05。采用Pearson檢驗相關性分析，檢驗慢性HBV感染者外周血中Tfh細胞與B細胞頻數(shù)的相關性和相關功能分子的表達頻數(shù)的相關性，檢驗實驗室指標與臨床指標的相關性。
　　結果：
　　1、在外周血中，健康志愿者Tfh細胞頻數(shù)為(15.47±8.72)％，免疫耐受者的Tfh細胞頻數(shù)為(17.66

6、±9.29)％，免疫激活者的Tfh細胞頻數(shù)為(22.10±18.28)％。經(jīng)統(tǒng)計分析三組間沒有顯著差異。
　　2、慢性HBV感染者外周血Tfh細胞上ICOS、PD1、CD40L分子的表達頻數(shù)顯著高于健康對照者，其中免疫耐受者和免疫激活者之間無顯著差異;慢性HBV感染患者外周血B細胞上的ICOSL、PDL1、CD40分子的表達頻數(shù)與健康對照組無顯著差異。
　　3、慢性HBV感染者外周血的Tfh細胞的CXCR5、Bcl6、IL-

7、4、IL-21mRNA的表達顯著高于健康對照者。
　　4、慢性HBV感染者外周血的ICOS陽性的Tfh細胞與ICOSL陽性的B細胞頻數(shù)呈正相關，PD1陽性的Tfh細胞與PDL1陽性的B細胞頻數(shù)呈正相關。
　　5、慢性HBV感染者外周血中Tfh細胞的頻數(shù)與ALT、AST呈正相關;CD40陽性的B細胞的頻數(shù)與ALT，AST，HBV-DNA呈負相關。
　　結論：
　　1、慢性HBV感染者的Tfh細胞的數(shù)量并未發(fā)生顯著改

8、變，可能病毒的感染是影響了Tfh細胞功能的異常而致免疫失衡。
　　2、慢性HBV感染者外周血中ICOS，PD1，CD40L在Tfh細胞上的表達頻數(shù)顯著高于健康對照組，可能是由于Tfh細胞與B細胞之間的相互作用的信號發(fā)生改變，導致了Tfh細胞輔助B細胞增殖和分化的作用的發(fā)生異常，外周循環(huán)中保護性抗體的分泌缺失，從而介導了HBV的持續(xù)感染。
　　3、慢性HBV感染者的Tfh細胞特異性功能分子Bcl6、CXCR5和細胞因子IL-4